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它具有下列特點:
1. 即開即用,用戶只需要提供樣品RNA模板。
2. 引物和探針經(jīng)過優(yōu)化,靈敏性高。
3. 提供陽性對照,便于區(qū)分假陰性樣品。
4. 特異性高,引物是根據(jù)高度保守區(qū)設計,不會跟其他病毒的RNA發(fā)生交叉反應。
5. 本產品足夠 50 次 20μL 體系的探針法熒光定量 RT-PCR 反應。
6. 本產品只能用于科研。
服務流程:
接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質量檢測——樣品cDNA合成——定量試驗——數(shù)據(jù)分析——結果交付——售后服務。
產品名稱 |
規(guī)格 |
貨號 |
50T貂源性成分(Martes)PCR檢測試劑盒 |
50T |
BH-P64104 |
實驗方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s →58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保溫7min。
使用方法:
一、樣品 DNA 的制備
用自選方法提取 Cps DNA。注意:DNA 純化方法是決定檢測靈敏度的關鍵因素。如果不能很好純化樣品 DNA,后面的 PCR 再靈敏也不能提高整體檢測靈敏度。
二、制備 Cps 標準曲線(以 10-10E6 這 6 個 10 倍稀釋度為例。由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原,本產品不提供活體病毒做陽性對照,只提供沒有傳染性的、可以直接使用的 DN**段作為陽性對照。
1. 標記 6 個離心管,分別為 6,5,4,3,2 和 1 號。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 超純水(*好用帶芯槍頭,下同)。
3. 先將本試劑盒提供的陽性對照用 TE 緩沖液或超純水 10 倍梯度稀釋到10E7 拷貝/μL(注:請不要將本試劑盒提供的標準品一次性稀釋至 10E7拷貝/μL,建議每次稀釋 10 倍,梯度稀釋至 10E7 拷貝/μL)。
4. 在 6 號管中加入 5 μL 10E7 拷貝/μL 的 Cps 陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 10E6 拷貝/μL 的陽性對照。
5. 換槍頭,從 6 號管中取 5 μL 溶液到 5 號管中,充分震蕩 1 分鐘,得 10E5拷貝/μL 的陽性對照。
6. 換槍頭,從 5 號管中取 5 μL 溶液到 4 號管中,重復上面的操作直到得到 6個稀釋度的陽性對照。
7. NC 管中不加任何陽性對照。
8. 從 1-6 號管中分別取 5 μL 和待測樣品一起進行定量 PCR(見下步),每個樣品做 3 次重復。PCR 后得到每個陽性對照稀釋樣品的熒光 PCR Ct 值,并以之為縱軸,以濃度的對數(shù)值為橫軸,繪制標準曲線。
注意事項:
①加入試劑的順序應一致,以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照雞血紅蛋白(HB)ELISA檢測試劑盒說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。
④底物A應揮發(fā),避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標板時應充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器 。
⑦實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質。
⑧試劑應按標簽說明書儲存,使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄,不可保存。
⑨不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。
磷酸化核轉錄因子NFKB-RelB蛋白抗體英文名稱:Phospho-RelB(Ser573) 0.1ml
磷酸化Ras相關GTP結合蛋白抗體英文名稱:phospho-RPH3AL(Ser232) 0.1ml
轉錄因子RelB蛋白抗體英文名稱:RelB 0.2ml
復制因子A蛋白2英文名稱:RPA32 0.2ml
磷酸化復制因子A蛋白2抗體英文名稱:phospho-RPA2(Thr21) 0.1ml
Ras相關GTP結合蛋白抗體英文名稱:RPH3AL 0.2ml
磷酸化ras基因相關蛋白Rab24抗體英文名稱:phospho-Rab24(Ser95) 0.1ml
磷酸化ras基因相關蛋白Rab24抗體英文名稱:phospho-Rab24(Tyr17) 0.1ml
磷酸化G蛋白信號轉導調節(jié)因子19抗體英文名稱:phospho-RGS19(Ser24) 0.1ml
磷酸化G蛋白信號轉導調節(jié)因子19抗體英文名稱:phospho-RGS19(Ser151) 0.1ml
磷酸化絲氨酸/蘇氨酸激酶p90RSK蛋白抗體英文名稱:phospho-RPS6KA1(Ser352) 0.1ml
磷酸化Rad51抗體英文名稱:phospho-RAD51(Tyr315) 0.1ml
磷酸化成骨特異性轉錄因子抗體英文名稱:phospho-RUNX2(Ser451) 0.1ml
G蛋白信號轉導調節(jié)因子19抗體英文名稱:RGS19 0.2ml
磷酸化G蛋白信號轉導調節(jié)因子19抗體英文名稱:phospho-RGS19(Tyr143) 0.1ml
50T貂源性成分(Martes)PCR檢測試劑盒去氧膽酸鹽枸櫞酸鹽乳糖蔗糖瓊脂 DCLS Agar 250g
Honda氏產毒肉湯 Honda Toxin-Producing Broth 250g
PSB(磷酸鹽緩沖液pH7.2) 9ml*20支/包
ModifiedSclohtens'Broth(MSB) Modified Sclohtens' Broth 250g
葡萄糖肉湯 Dextrose Broth 250g
肉湯培養(yǎng)基 the Smallest Broth Medium 250g
HB-PET自誘導培養(yǎng)基 HB-PET Auto-Indection Medium 250g
m-遠藤氏培養(yǎng)基 M-Endo Medium 250g
CAYE培養(yǎng)基 CAYE Medium 250g
接種測試微生物瓊脂培養(yǎng)基 Medium Ⅱ(for Transferring the Test Organism) 250g
種和底層瓊脂培養(yǎng)基 Medium I(foe Seed and Basal Layer) 250g
無機鹽培養(yǎng)基 Inorganic Salt Medium 250g
蔗糖胰蛋白胨肉湯 Sucrose Tryptone Broth 200