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它具有下列特點(diǎn):
1. 即開即用,用戶只需要提供樣品RNA模板。
2. 引物和探針經(jīng)過優(yōu)化,靈敏性高。
3. 提供陽性對(duì)照,便于區(qū)分假陰性樣品。
4. 特異性高,引物是根據(jù)高度保守區(qū)設(shè)計(jì),不會(huì)跟其他病毒的RNA發(fā)生交叉反應(yīng)。
5. 本產(chǎn)品足夠 50 次 20μL 體系的探針法熒光定量 RT-PCR 反應(yīng)。
6. 本產(chǎn)品只能用于科研。
服務(wù)流程:
接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測——樣品cDNA合成——定量試驗(yàn)——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務(wù)。
產(chǎn)品名稱 |
規(guī)格 |
貨號(hào) |
48TRNA擴(kuò)增試劑盒 |
48T |
BH-P64397 |
實(shí)驗(yàn)方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s →58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保溫7min。
使用方法:
一、樣品 DNA 的制備
用自選方法提取 Cps DNA。注意:DNA 純化方法是決定檢測靈敏度的關(guān)鍵因素。如果不能很好純化樣品 DNA,后面的 PCR 再靈敏也不能提高整體檢測靈敏度。
二、制備 Cps 標(biāo)準(zhǔn)曲線(以 10-10E6 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽性對(duì)照,只提供沒有傳染性的、可以直接使用的 DN**段作為陽性對(duì)照。
1. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管,分別為 6,5,4,3,2 和 1 號(hào)。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 超純水(*好用帶芯槍頭,下同)。
3. 先將本試劑盒提供的陽性對(duì)照用 TE 緩沖液或超純水 10 倍梯度稀釋到10E7 拷貝/μL(注:請(qǐng)不要將本試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)品一次性稀釋至 10E7拷貝/μL,建議每次稀釋 10 倍,梯度稀釋至 10E7 拷貝/μL)。
4. 在 6 號(hào)管中加入 5 μL 10E7 拷貝/μL 的 Cps 陽性對(duì)照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 10E6 拷貝/μL 的陽性對(duì)照。
5. 換槍頭,從 6 號(hào)管中取 5 μL 溶液到 5 號(hào)管中,充分震蕩 1 分鐘,得 10E5拷貝/μL 的陽性對(duì)照。
6. 換槍頭,從 5 號(hào)管中取 5 μL 溶液到 4 號(hào)管中,重復(fù)上面的操作直到得到 6個(gè)稀釋度的陽性對(duì)照。
7. NC 管中不加任何陽性對(duì)照。
8. 從 1-6 號(hào)管中分別取 5 μL 和待測樣品一起進(jìn)行定量 PCR(見下步),每個(gè)樣品做 3 次重復(fù)。PCR 后得到每個(gè)陽性對(duì)照稀釋樣品的熒光 PCR Ct 值,并以之為縱軸,以濃度的對(duì)數(shù)值為橫軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
注意事項(xiàng):
①加入試劑的順序應(yīng)一致,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照雞血紅蛋白(HB)ELISA檢測試劑盒說明書中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
④底物A應(yīng)揮發(fā),避免長時(shí)間打開蓋子。底物B對(duì)光敏感,避免長時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時(shí),避免使用帶金屬部分的加樣器 。
⑦實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。
⑧試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲(chǔ)存,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存。
⑨不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
重組人表皮生長因子rh-EGF(Recombinant Epidermal growth factor) 0.1mg
神經(jīng)生長因子的一種(抗原)TrK A (h-NGFR) (p140- TrK A) 0.5mg
神經(jīng)生長因子的一種(抗原)TrK A.B.C 0.5mg
活化半胱胺酸蛋白酶蛋白-3抗原active Caspase 3(caspase-3 p12 subunit) 0.5mg
重組谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶GST標(biāo)簽蛋白r-GST(Recombinant Glutathione S-T Ahents) 0.1mg
半胱胺酸蛋白酶蛋白-4抗原CASP4(Caspase-4) 0.5mg
神經(jīng)生長因子受體的一種(抗原)Trk B 0.5mg
重組生長分化因子8/肌肉抑制素GDF8/MSTN(growth differntiation factor 8) 0.1mg
神經(jīng)生長因子受體的一種(抗原)Trk B 0.5mg
神經(jīng)生長因子受體的一種(抗原)Trk C 0.5mg
促甲狀腺素受體(抗原)TSHR (Thyroid stimulating hormone receptor)(NT) 0.5mg
半胱氨酸蛋白酶8抗原Caspase-8 (pro Mch5) 0.5mg
促甲狀腺素受體(抗原)TSHR (Thyroid stimulating hormone receptor)(CT) 0.5mg
微管蛋白(抗原)Tubulin-Alpha 0.5mg
酪氨酸羥化酶(抗原)TY3H ( Tyrosine Hydroxylase ) 0.5mg
48TRNA擴(kuò)增試劑盒野菊花 CAS 訂購|咨詢 規(guī)格: 1g
恩卡韋 CAS 訂購|咨詢 規(guī)格: 100mg
枳實(shí)(酸橙) CAS 訂購|咨詢 規(guī)格: 1g
洋地黃 CAS 訂購|咨詢 規(guī)格: 約2.5g
草素 CAS 73-03-0 訂購|咨詢 規(guī)格: 20mg
派可林酸 CAS 535-75-1 訂購|咨詢 規(guī)格: 20mg
二羥丙茶堿 CAS 479-18-5 訂購|咨詢 規(guī)格: 100mg
烏梅 CAS 訂購|咨詢 規(guī)格: 2g
羥甲煙胺 CAS 3569-99-1 訂購|咨詢 規(guī)格: 100mg
谷氨酰胺 CAS 訂購|咨詢 規(guī)格: 250mg
環(huán)磷腺苷 CAS 訂購|咨詢 規(guī)格: 50mg
阿普 CAS 訂購|咨詢 規(guī)格: 100mg
甲磺酸齊拉 CAS 訂購|咨詢 規(guī)格: 100mg
葛根 CAS 訂購|咨詢 規(guī)格: 1g
江南卷柏 CAS 訂購|咨詢 規(guī)格: 10g
薄荷腦 CAS 1490-04-6 訂購|咨詢 規(guī)格: 100mg