試劑配制:

1、酶聯(lián)板assay plate ：一塊96孔或者48孔。
2、標(biāo)準(zhǔn)品standard：2瓶凍干品。
3、樣品稀釋液sample diluent：1×20ml/瓶。
4、生物素標(biāo)記抗體稀釋液biotin-antibody diluent：1×10ml/瓶。
5、辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素稀釋液 hrp-avidin diluent：1×10ml/瓶。
6、生物素標(biāo)記抗體biotin-antibody：1×120μl/瓶1：100
7、辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素hrp-avidin：1×120μl/瓶1：100
8、底物溶液tmb e：1×10ml/瓶。
9、濃洗滌液wash buffer：1×20ml/瓶，使用時(shí)每瓶用蒸餾水稀釋25倍。
10、終止液stop solution：1×10ml/瓶2n h2so4。

試劑準(zhǔn)備：
1. 使用前將所有的試劑和標(biāo)本緩慢均衡至室溫(18-25oC)，試劑不能直接在37oC溶解。
2. 標(biāo)準(zhǔn)品(凍干品)：每瓶標(biāo)準(zhǔn)品加入標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液1mL，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解，其濃度為2000pg/mL。準(zhǔn)備7個(gè)稀釋標(biāo)準(zhǔn)品的EP管，每個(gè)EP管中加入150μL的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液，如圖所示依次倍比稀釋成不同的梯度， 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液(0pg/mL)直接作為空白孔。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性，每次實(shí)驗(yàn)請使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。
3. 濃洗滌液：用580mL蒸餾水或去離子水將20mL濃洗滌液稀釋至600mL，進(jìn)行30倍稀釋。

我司主營產(chǎn)品之一，產(chǎn)品皆嚴(yán)格按照相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行生產(chǎn)，并經(jīng)過了嚴(yán)格地反復(fù)地檢測，我們以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)膽B(tài)度保證產(chǎn)品的質(zhì)量，從而保證您的實(shí)驗(yàn)順利進(jìn)行。產(chǎn)品供貨周期短，供貨及時(shí)，且我司還提供完整的售前和售后服務(wù)。本公司產(chǎn)品僅用于科研。

樣本實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備：
ELISA試劑盒液體樣本：包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清等。
（1）血清
室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
（2）血漿：
應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
（3）尿液：
用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實(shí)行。
（4）細(xì)胞培養(yǎng)上清：
檢測分泌性的成份時(shí)，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。
（5）培養(yǎng)細(xì)胞
檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí)，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
（6）組織標(biāo)本
切割標(biāo)本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿化。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。

注意事項(xiàng)：

1. 試劑盒應(yīng)在有效期內(nèi)使用，請不要使用過期的試劑。
2. 試劑盒未使用時(shí)應(yīng)保存在 2-8℃冰箱，已復(fù)溶但未用完的標(biāo)準(zhǔn)品，請丟棄。
3. 試劑盒使用前請?jiān)谑覝鼗謴?fù) 30 min，且充分混勻試劑盒里的各種成份及制備的樣品。
4. 在試驗(yàn)中標(biāo)準(zhǔn)品和樣本建議作復(fù)孔檢測，且加入試劑的順序應(yīng)保持一致。
5. 為避免交叉污染，請?jiān)谠囼?yàn)中使用 1 次性試管，槍頭，封板膜及潔凈塑料容器。
6. 濃縮生物素化抗體和濃縮酶結(jié)合物的體積較少，在運(yùn)輸過程中微量液體會(huì)沾到管壁及瓶蓋上，使用前請離心處理（5-10 S 即可），使管壁上的液體集中在管底部，取用時(shí)，請用移液器小心吹打幾次。
7. 除了試劑盒中的濃縮洗滌液和終止液可以通用外，請不要使用其他來源試劑盒內(nèi)含的試劑代替本試劑盒中的某單個(gè)組分。
8. 為保證結(jié)果準(zhǔn)確，每次檢測均需做標(biāo)準(zhǔn)曲線。

操作流程：
（1）待測樣品孔中每孔加入待測樣品100μl，每種樣品設(shè)3個(gè)平行孔；設(shè)兩個(gè)陰性對照孔，每孔加未處理組的細(xì)胞裂解液100μl；另設(shè)一個(gè)空白對照孔，加入純細(xì)胞裂解液100μl。 
（2）酶標(biāo)板置4℃，包被過夜。
（3）洗板：吸干孔內(nèi)反應(yīng)液，用洗滌液過洗一遍（將洗滌液注滿板孔后，即甩去），之后將洗滌液注滿板孔，浸泡1-2分鐘，間歇搖動(dòng)。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干。重復(fù)洗滌3-4次。
（4）陰性對照孔每孔加入PBS 50μl，樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。 
（5）酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi)，孵育60min。 
（6）洗板，同（4）。 
（7）每孔加1:5000稀釋的HRP-標(biāo)記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。 
（8）酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi)，孵育60min。 
（9）洗板，同（4）。 
（10）每孔加TMB顯色液 100μl，輕輕混勻10s，置37℃暗處反應(yīng)15-20min。 
（11）每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應(yīng)。 
（12）分別測450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2，終測得的OD值為兩者之差（W1-W2），以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。
（13）數(shù)據(jù)處理：在得出標(biāo)本（S）和陰性對照（N）的 OD值后，計(jì)算S/N值。S/N≥2.1為陽性判定標(biāo)準(zhǔn)。
款冬巴耳二醇 bauer-7-ene-3β, 16α-diol 5mg

葛根素芹菜糖苷 Puerarin apioside 10mg

葛根素-6″-O-木糖苷  Puerarin 6"-O-xyloside 10mg

劍葉龍血素A cochinchinenin A 20mg

二酚 cannabidiol 5mg

醉魚草皂苷IVb Buddlejasaponin IVb 20mg

升麻醇-3-O-β-D-吡喃木糖苷 Cimigenol3-O-β-D -xylpyranoside 10mg

益母草苷 Ajugol 20mg

原偽金絲桃素 95% Protopseudohypericin 10mg

木犀草素-7-葡萄糖醛酸苷 Luteolin-7-glucuronide 10mg

遠(yuǎn)志呫噸酮III Polygalaxanthone III 20mg調(diào)亡誘導(dǎo)因子家族蛋白PEF1抗體

酸性核磷蛋白32家族B抗體

前列腺素EP1受體抗體

脯氨酸水解酶4抗體

程序性細(xì)胞死亡2抗體

磷酸核糖胺咪羧化酶抗體

血小板源性生長因子AB+BB抗體

三磷酸腺苷門控陽離子通道蛋白抗體

多腺苷二磷酸多聚酶3抗體/多聚ADP-核糖聚合酶3

多腺苷二磷酸多聚酶4抗體/多聚ADP-核糖聚合酶4

前細(xì)胞脹亡受體誘導(dǎo)膜損傷蛋白抗體

肽聚糖識(shí)別蛋白1抗體

內(nèi)脂素/前B細(xì)胞克隆增強(qiáng)因子-2（C端抗體）

人Ⅳ型膠原α1(COL4α1)博湖ELISA試劑盒ET-1  內(nèi)皮素-1抗體 0.1ml

腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(BDNF)檢測試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗(yàn)法)    ELISA Kit for Brain Derived Neurotrophic Factor (BDNF)    規(guī)格：48T/96T 進(jìn)口、國產(chǎn)

FGFBP  纖維細(xì)胞生長因子結(jié)合蛋白抗體 0.1ml

輔肌動(dòng)蛋白α2(ACTN2)檢測試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗(yàn)法)    ELISA Kit for Actinin Alpha 2 (ACTN2)    規(guī)格：48T/96T 進(jìn)口、國產(chǎn)

ABCG8  三磷酸腺苷結(jié)合轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白G超家族成員8抗體 0.2ml

唾液淀粉酶α1(AMY1)檢測試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗(yàn)法)    ELISA Kit for Amylase Alpha 1, Salivary (AMY1)    規(guī)格：48T/96T 進(jìn)口、國產(chǎn)

Agpat2  溶血磷脂酸?；D(zhuǎn)移酶β抗體 0.2ml

一氧化氮合酶運(yùn)輸因子(STRIN)檢測試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗(yàn)法)    ELISA Kit for Nitric Oxide Synthase Trafficker (STRIN)    規(guī)格：48T/96T 進(jìn)口、國產(chǎn)

Integrin beta 6  整合素β6抗體（Integrin β6） 0.2ml

腺苷酸環(huán)化酶關(guān)聯(lián)蛋白1(CAP1)檢測試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗(yàn)法)    ELISA Kit for Adenylyl Cyclase Associated Protein 1 (CAP1)    規(guī)格：48T/96T 進(jìn)口、國產(chǎn)

ADORA3  腺苷受體A3抗體 0.1ml

蛋白酶激活受體3(PAR3)檢測試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗(yàn)法)    ELISA Kit for Protease Activated Receptor 3 (PAR3)    規(guī)格：48T/96T 進(jìn)口、國產(chǎn)