試劑配制:

1、酶聯(lián)板assay plate ：一塊96孔或者48孔。
2、標(biāo)準(zhǔn)品standard：2瓶凍干品。
3、樣品稀釋液sample diluent：1×20ml/瓶。
4、生物素標(biāo)記抗體稀釋液biotin-antibody diluent：1×10ml/瓶。
5、辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素稀釋液 hrp-avidin diluent：1×10ml/瓶。
6、生物素標(biāo)記抗體biotin-antibody：1×120μl/瓶1：100
7、辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素hrp-avidin：1×120μl/瓶1：100
8、底物溶液tmb e：1×10ml/瓶。
9、濃洗滌液wash buffer：1×20ml/瓶，使用時每瓶用蒸餾水稀釋25倍。
10、終止液stop solution：1×10ml/瓶2n h2so4。

試劑準(zhǔn)備：
1. 使用前將所有的試劑和標(biāo)本緩慢均衡至室溫(18-25oC)，試劑不能直接在37oC溶解。
2. 標(biāo)準(zhǔn)品(凍干品)：每瓶標(biāo)準(zhǔn)品加入標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液1mL，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時反復(fù)顛倒/搓動以助溶解，其濃度為2000pg/mL。準(zhǔn)備7個稀釋標(biāo)準(zhǔn)品的EP管，每個EP管中加入150μL的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液，如圖所示依次倍比稀釋成不同的梯度， 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液(0pg/mL)直接作為空白孔。為保證實驗結(jié)果有效性，每次實驗請使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。
3. 濃洗滌液：用580mL蒸餾水或去離子水將20mL濃洗滌液稀釋至600mL，進(jìn)行30倍稀釋。

我司主營產(chǎn)品之一，產(chǎn)品皆嚴(yán)格按照相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行生產(chǎn)，并經(jīng)過了嚴(yán)格地反復(fù)地檢測，我們以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)膽B(tài)度保證產(chǎn)品的質(zhì)量，從而保證您的實驗順利進(jìn)行。產(chǎn)品供貨周期短，供貨及時，且我司還提供完整的售前和售后服務(wù)。本公司產(chǎn)品僅用于科研。

樣本實驗前準(zhǔn)備：
ELISA試劑盒液體樣本：包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清等。
（1）血清
室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
（2）血漿：
應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
（3）尿液：
用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實行。
（4）細(xì)胞培養(yǎng)上清：
檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。
（5）培養(yǎng)細(xì)胞
檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
（6）組織標(biāo)本
切割標(biāo)本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿化。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。

注意事項：

1. 試劑盒應(yīng)在有效期內(nèi)使用，請不要使用過期的試劑。
2. 試劑盒未使用時應(yīng)保存在 2-8℃冰箱，已復(fù)溶但未用完的標(biāo)準(zhǔn)品，請丟棄。
3. 試劑盒使用前請在室溫恢復(fù) 30 min，且充分混勻試劑盒里的各種成份及制備的樣品。
4. 在試驗中標(biāo)準(zhǔn)品和樣本建議作復(fù)孔檢測，且加入試劑的順序應(yīng)保持一致。
5. 為避免交叉污染，請在試驗中使用 1 次性試管，槍頭，封板膜及潔凈塑料容器。
6. 濃縮生物素化抗體和濃縮酶結(jié)合物的體積較少，在運輸過程中微量液體會沾到管壁及瓶蓋上，使用前請離心處理（5-10 S 即可），使管壁上的液體集中在管底部，取用時，請用移液器小心吹打幾次。
7. 除了試劑盒中的濃縮洗滌液和終止液可以通用外，請不要使用其他來源試劑盒內(nèi)含的試劑代替本試劑盒中的某單個組分。
8. 為保證結(jié)果準(zhǔn)確，每次檢測均需做標(biāo)準(zhǔn)曲線。

操作流程：
（1）待測樣品孔中每孔加入待測樣品100μl，每種樣品設(shè)3個平行孔；設(shè)兩個陰性對照孔，每孔加未處理組的細(xì)胞裂解液100μl；另設(shè)一個空白對照孔，加入純細(xì)胞裂解液100μl。 
（2）酶標(biāo)板置4℃，包被過夜。
（3）洗板：吸干孔內(nèi)反應(yīng)液，用洗滌液過洗一遍（將洗滌液注滿板孔后，即甩去），之后將洗滌液注滿板孔，浸泡1-2分鐘，間歇搖動。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干。重復(fù)洗滌3-4次。
（4）陰性對照孔每孔加入PBS 50μl，樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。 
（5）酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi)，孵育60min。 
（6）洗板，同（4）。 
（7）每孔加1:5000稀釋的HRP-標(biāo)記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。 
（8）酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi)，孵育60min。 
（9）洗板，同（4）。 
（10）每孔加TMB顯色液 100μl，輕輕混勻10s，置37℃暗處反應(yīng)15-20min。 
（11）每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應(yīng)。 
（12）分別測450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2，終測得的OD值為兩者之差（W1-W2），以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。
（13）數(shù)據(jù)處理：在得出標(biāo)本（S）和陰性對照（N）的 OD值后，計算S/N值。S/N≥2.1為陽性判定標(biāo)準(zhǔn)。
龍膽酸 Gentisic Acid 20mg

香草乙酮（4-羥基-3-甲乙酮） Acetovanillone（4-Hydroxy-3-methoxyacetophenone） 20mg

14-甲?；鋮擒镙谴螇A 14-Formyldihydrorutaecarpine 10mg

去?；}藦苷元 Deacylmetaplexigenin 10mg

3-O-乙酰青陽參苷元 3-O-Acetylqingyangshengenin 10mg

O-甲基蝙蝠葛堿97% O-methyldauricine 10Mg

O-芐基蝙蝠葛堿95% O-Benzyldauricine 10mg

10,11-二甲氧基-α-育亨賓 10,11-Dimethoxy-α-yohimbine 10mg

番荔枝寧 Xylopinine 10mg

白屈菜堿 Chelidonine 10mg

紫地黃苷C（95%） Purpureaside C 5mg黑色素瘤優(yōu)先表達(dá)抗原抗體

磷脂酶C1樣蛋白抗體

同源盒蛋白HOXB13抗體

α型-過氧化酶活化增生受體抗體（PPAR α, PPAR-α）

磷酸化嗜中性粒細(xì)胞胞漿因子4抗體

核糖體S6蛋白激酶β2抗體

磷酸化核糖體S6K2蛋白激酶抗體

磷酸化核糖體S6蛋白激酶β2抗體

磷酸化P63腫瘤抑制基因抗體

纖溶酶原激活物抑制因子抗體

前纖維蛋白1抗體

胃蛋白酶原C抗體

磷酸化蛋白激酶C亞性D型抗體

人Ⅰ型前膠原羧基端原肽(PⅠCP)免費代測ELISA KitHIPK2  Fas相互作用蛋白激酶2抗體 0.2ml

細(xì)胞外基質(zhì)蛋白1(ECM1)檢測試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗法)    ELISA Kit for Extracellular Matrix Protein 1 (ECM1)    規(guī)格：48T/96T 進(jìn)口、國產(chǎn)

GABRA3/GABA A Receptor alpha 3  G氨基受體α3抗體 0.2ml

細(xì)胞色素P450家族成員3A4(CYP3A4)檢測試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗法)    ELISA Kit for Cytochrome P450 3A4 (CYP3A4)    規(guī)格：48T/96T 進(jìn)口、國產(chǎn)

BCAT1  胞漿支鏈氨基酸酸轉(zhuǎn)氨酶抗體 0.1ml

低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白4(LRP4)檢測試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗法)    ELISA Kit for Low Density Lipoprotein Receptor Related Protein 4 (LRP4)    規(guī)格：48T/96T 進(jìn)口、國產(chǎn)

OTC  鳥氨酸氨基甲酰轉(zhuǎn)移酶抗體 0.1ml

角質(zhì)轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶(TGM1)檢測試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗法)    ELISA Kit for Transglutaminase 1, Keraticyte (TGM1)    規(guī)格：48T/96T 進(jìn)口、國產(chǎn)

PDCD7  凋亡相關(guān)蛋白7抗體 0.2ml

胰蛋白酶X3(TRYX3)檢測試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗法)    ELISA Kit for Trypsin X3 (TRYX3)    規(guī)格：48T/96T 進(jìn)口、國產(chǎn)

phospho-ER-beta(ser87)  磷酸化雌受體β抗體 0.1ml

Nicalin蛋白(NCLN)檢測試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗法)    ELISA Kit for Nicalin (NCLN)    規(guī)格：48T/96T 進(jìn)口、國產(chǎn)