試劑配制:

1、酶聯(lián)板assay plate ：一塊96孔或者48孔。
2、標(biāo)準(zhǔn)品standard：2瓶凍干品。
3、樣品稀釋液sample diluent：1×20ml/瓶。
4、生物素標(biāo)記抗體稀釋液biotin-antibody diluent：1×10ml/瓶。
5、辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素稀釋液 hrp-avidin diluent：1×10ml/瓶。
6、生物素標(biāo)記抗體biotin-antibody：1×120μl/瓶1：100
7、辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素hrp-avidin：1×120μl/瓶1：100
8、底物溶液tmb e：1×10ml/瓶。
9、濃洗滌液wash buffer：1×20ml/瓶，使用時每瓶用蒸餾水稀釋25倍。
10、終止液stop solution：1×10ml/瓶2n h2so4。

試劑準(zhǔn)備：
1. 使用前將所有的試劑和標(biāo)本緩慢均衡至室溫(18-25oC)，試劑不能直接在37oC溶解。
2. 標(biāo)準(zhǔn)品(凍干品)：每瓶標(biāo)準(zhǔn)品加入標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液1mL，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時反復(fù)顛倒/搓動以助溶解，其濃度為2000pg/mL。準(zhǔn)備7個稀釋標(biāo)準(zhǔn)品的EP管，每個EP管中加入150μL的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液，如圖所示依次倍比稀釋成不同的梯度， 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液(0pg/mL)直接作為空白孔。為保證實驗結(jié)果有效性，每次實驗請使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。
3. 濃洗滌液：用580mL蒸餾水或去離子水將20mL濃洗滌液稀釋至600mL，進行30倍稀釋。

我司主營產(chǎn)品之一，產(chǎn)品皆嚴(yán)格按照相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)進行生產(chǎn)，并經(jīng)過了嚴(yán)格地反復(fù)地檢測，我們以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)膽B(tài)度保證產(chǎn)品的質(zhì)量，從而保證您的實驗順利進行。產(chǎn)品供貨周期短，供貨及時，且我司還提供完整的售前和售后服務(wù)。本公司產(chǎn)品僅用于科研。

樣本實驗前準(zhǔn)備：
ELISA試劑盒液體樣本：包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清等。
（1）血清
室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
（2）血漿：
應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
（3）尿液：
用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實行。
（4）細(xì)胞培養(yǎng)上清：
檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。
（5）培養(yǎng)細(xì)胞
檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
（6）組織標(biāo)本
切割標(biāo)本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿化。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。

注意事項：

1. 試劑盒應(yīng)在有效期內(nèi)使用，請不要使用過期的試劑。
2. 試劑盒未使用時應(yīng)保存在 2-8℃冰箱，已復(fù)溶但未用完的標(biāo)準(zhǔn)品，請丟棄。
3. 試劑盒使用前請在室溫恢復(fù) 30 min，且充分混勻試劑盒里的各種成份及制備的樣品。
4. 在試驗中標(biāo)準(zhǔn)品和樣本建議作復(fù)孔檢測，且加入試劑的順序應(yīng)保持一致。
5. 為避免交叉污染，請在試驗中使用 1 次性試管，槍頭，封板膜及潔凈塑料容器。
6. 濃縮生物素化抗體和濃縮酶結(jié)合物的體積較少，在運輸過程中微量液體會沾到管壁及瓶蓋上，使用前請離心處理（5-10 S 即可），使管壁上的液體集中在管底部，取用時，請用移液器小心吹打幾次。
7. 除了試劑盒中的濃縮洗滌液和終止液可以通用外，請不要使用其他來源試劑盒內(nèi)含的試劑代替本試劑盒中的某單個組分。
8. 為保證結(jié)果準(zhǔn)確，每次檢測均需做標(biāo)準(zhǔn)曲線。

操作流程：
（1）待測樣品孔中每孔加入待測樣品100μl，每種樣品設(shè)3個平行孔；設(shè)兩個陰性對照孔，每孔加未處理組的細(xì)胞裂解液100μl；另設(shè)一個空白對照孔，加入純細(xì)胞裂解液100μl。 
（2）酶標(biāo)板置4℃，包被過夜。
（3）洗板：吸干孔內(nèi)反應(yīng)液，用洗滌液過洗一遍（將洗滌液注滿板孔后，即甩去），之后將洗滌液注滿板孔，浸泡1-2分鐘，間歇搖動。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干。重復(fù)洗滌3-4次。
（4）陰性對照孔每孔加入PBS 50μl，樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。 
（5）酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi)，孵育60min。 
（6）洗板，同（4）。 
（7）每孔加1:5000稀釋的HRP-標(biāo)記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。 
（8）酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi)，孵育60min。 
（9）洗板，同（4）。 
（10）每孔加TMB顯色液 100μl，輕輕混勻10s，置37℃暗處反應(yīng)15-20min。 
（11）每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應(yīng)。 
（12）分別測450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2，終測得的OD值為兩者之差（W1-W2），以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。
（13）數(shù)據(jù)處理：在得出標(biāo)本（S）和陰性對照（N）的 OD值后，計算S/N值。S/N≥2.1為陽性判定標(biāo)準(zhǔn)。
二乙酰甘油一酸酯標(biāo)準(zhǔn)品 英文名稱  Diacetylated Monoglycerides 規(guī)格：  200mg 進口、國產(chǎn)

二熒光素標(biāo)準(zhǔn)品 英文名稱  Diacetylfluorescein 規(guī)格：  200mg 進口、國產(chǎn)

泛影酸標(biāo)準(zhǔn)品 英文名稱  Diatrizoic Acid 規(guī)格：  100mg 進口、國產(chǎn)

泛影酸相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品 英文名稱   規(guī)格：  50mg 進口、國產(chǎn)

氯噻嗪標(biāo)準(zhǔn)品 英文名稱  Diazoxide 規(guī)格：  200mg 進口、國產(chǎn)

鹽酸地布卡因標(biāo)準(zhǔn)品 英文名稱  Dibucaine Hydrochloride 規(guī)格：  500mg 進口、國產(chǎn)

鄰苯二二丁酯標(biāo)準(zhǔn)品 英文名稱  Dibutyl Phthalate 規(guī)格：  200mg 進口、國產(chǎn)

癸二酸二丁酯標(biāo)準(zhǔn)品 英文名稱  Dibutyl Sebacate (AS) 規(guī)格：  1ml 進口、國產(chǎn)

比林標(biāo)準(zhǔn)品 英文名稱  Dichloralphenazone CIV 規(guī)格：  200mg 進口、國產(chǎn)

2,4-二標(biāo)準(zhǔn)品 英文名稱  2,4-Dichlorophenol 規(guī)格：  100mg 進口、國產(chǎn) 人 CD226 / DNAM-1 基因全長ORF克隆

人 CD226 / DNAM-1 基因全長ORF克隆

小鼠 FCRL1 基因全長ORF克隆

大鼠 HSPA8 基因全長ORF克隆

人 Biglycan 基因全長ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶His標(biāo)簽

人 KIT 基因全長ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶Myc標(biāo)簽

人 EVI2A 基因全長ORF克隆

大鼠 CNTN2 基因全長ORF克隆

小鼠 LY86 / MD1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)

人 HSPE1 基因全長ORF克隆

大鼠 CLEC4D / CLECSF8 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)

人 KLKB1 基因全長ORF克隆

小鼠一氧化氮合成酶(NOS)博湖ELISA試劑盒Phospho-NFKB1(Ser338)  磷酸化細(xì)胞核因子p50/k基因結(jié)合核因子抗體 0.1ml

谷氨酸脫氫酶(GDH)檢測試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗法)    ELISA Kit for Glutamate Dehydrogenase 1 (GDH)    規(guī)格：48T/96T 進口、國產(chǎn)

NUP54  NUP54抗體 0.2ml

白介素1受體拮抗劑(IL1RA)檢測試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗法)    ELISA Kit for Interleukin 1 Receptor Antagonist (IL1RA)    規(guī)格：48T/96T 進口、國產(chǎn)

Phospho-p73(Tyr99)  磷酸化P73腫瘤抑制基因抗體 0.1ml

絲氨酸蛋白酶12(PRSS12)檢測試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗法)    ELISA Kit for Protease, Serine 12 (PRSS12)    規(guī)格：48T/96T 進口、國產(chǎn)

Phospho-PDGFRA(Tyr849)/PDGFRB(Tyr857)  磷酸化血小板源性生長因子受體α/β抗體 0.1ml

磷脂酸(PA)檢測試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗法)    ELISA Kit for Phosphatidic Acid (PA)    規(guī)格：48T/96T 進口、國產(chǎn)

Phospho-PLC beta3 (Ser537)  磷酸化磷酯酶Cβ3抗體 0.1ml

硫氧還蛋白還原酶1(TrxR1)檢測試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗法)    ELISA Kit for Thioredoxin Reductase 1 (TrxR1)    規(guī)格：48T/96T 進口、國產(chǎn)

RACK1  受體激活蛋白激酶C1抗體 0.2ml

絲氨酸蛋白酶1(PRSS1)檢測試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗法)    ELISA Kit for Protease, Serine 1 (PRSS1)    規(guī)格：48T/96T 進口、國產(chǎn)