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操作流程:
(1)待測樣品孔中每孔加入待測樣品100μl,每種樣品設3個平行孔;設兩個陰性對照孔,每孔加未處理組的細胞裂解液100μl;另設一個空白對照孔,加入純細胞裂解液100μl。
(2)酶標板置4℃,包被過夜。
(3)洗板:吸干孔內(nèi)反應液,用洗滌液過洗一遍(將洗滌液注滿板孔后,即甩去),之后將洗滌液注滿板孔,浸泡1-2分鐘,間歇搖動。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干。重復洗滌3-4次。
(4)陰性對照孔每孔加入PBS 50μl,樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。
(5)酶標板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),孵育60min。
(6)洗板,同(4)。
(7)每孔加1:5000稀釋的HRP-標記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。
(8)酶標板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),孵育60min。
(9)洗板,同(4)。
(10)每孔加TMB顯色液 100μl,輕輕混勻10s,置37℃暗處反應15-20min。
(11)每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應。
(12)分別測450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2,終測得的OD值為兩者之差(W1-W2),以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。
(13)數(shù)據(jù)處理:在得出標本(S)和陰性對照(N)的 OD值后,計算S/N值。S/N≥2.1為陽性判定標準。
我司主營產(chǎn)品之一,產(chǎn)品皆嚴格按照相關(guān)標準進行生產(chǎn),并經(jīng)過了嚴格地反復地檢測,我們以嚴謹?shù)膽B(tài)度保證產(chǎn)品的質(zhì)量,從而保證您的實驗順利進行。產(chǎn)品供貨周期短,供貨及時,且我司還提供完整的售前和售后服務。本公司產(chǎn)品僅用于科研。
產(chǎn)品名稱 |
小鼠核因子E2相關(guān)因子2(Nrf2)博湖ELISA試劑盒 |
英文名稱 |
Mouse Nuclear factor erythroid 2-related factor 2,Nrf2 ELISA Kit |
貨號 |
PM104230 |
試劑配制:
1、酶聯(lián)板assay plate :一塊96孔或者48孔。
2、標準品standard:2瓶凍干品。
3、樣品稀釋液sample diluent:1×20ml/瓶。
4、生物素標記抗體稀釋液biotin-antibody diluent:1×10ml/瓶。
5、辣根過氧化物酶標記親和素稀釋液 hrp-avidin diluent:1×10ml/瓶。
6、生物素標記抗體biotin-antibody:1×120μl/瓶1:100
7、辣根過氧化物酶標記親和素hrp-avidin:1×120μl/瓶1:100
8、底物溶液tmb e:1×10ml/瓶。
9、濃洗滌液wash buffer:1×20ml/瓶,使用時每瓶用蒸餾水稀釋25倍。
10、終止液stop solution:1×10ml/瓶2n h2so4。
試劑準備:
1. 使用前將所有的試劑和標本緩慢均衡至室溫(18-25oC),試劑不能直接在37oC溶解。
2. 標準品(凍干品):每瓶標準品加入標準品稀釋液1mL,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復顛倒/搓動以助溶解,其濃度為2000pg/mL。準備7個稀釋標準品的EP管,每個EP管中加入150μL的標準品稀釋液,如圖所示依次倍比稀釋成不同的梯度, 標準品稀釋液(0pg/mL)直接作為空白孔。為保證實驗結(jié)果有效性,每次實驗請使用新的標準品溶液。
3. 濃洗滌液:用580mL蒸餾水或去離子水將20mL濃洗滌液稀釋至600mL,進行30倍稀釋。
樣本實驗前準備:
ELISA試劑盒液體樣本:包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養(yǎng)上清等。
(1)血清
室溫血液自然凝固10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
(2)血漿:
應根據(jù)標本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
(3)尿液:
用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實行。
(4)細胞培養(yǎng)上清:
檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。
(5)培養(yǎng)細胞
檢測細胞內(nèi)的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融或加入組織蛋白萃取試劑,以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
(6)組織標本
切割標本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。標本融化后仍然保?-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標本勻漿化。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。
注意事項:
1. 試劑盒應在有效期內(nèi)使用,請不要使用過期的試劑。
2. 試劑盒未使用時應保存在 2-8℃冰箱,已復溶但未用完的標準品,請丟棄。
3. 試劑盒使用前請在室溫恢復 30 min,且充分混勻試劑盒里的各種成份及制備的樣品。
4. 在試驗中標準品和樣本建議作復孔檢測,且加入試劑的順序應保持一致。
5. 為避免交叉污染,請在試驗中使用 1 次性試管,槍頭,封板膜及潔凈塑料容器。
6. 濃縮生物素化抗體和濃縮酶結(jié)合物的體積較少,在運輸過程中微量液體會沾到管壁及瓶蓋上,使用前請離心處理(5-10 S 即可),使管壁上的液體集中在管底部,取用時,請用移液器小心吹打幾次。
7. 除了試劑盒中的濃縮洗滌液和終止液可以通用外,請不要使用其他來源試劑盒內(nèi)含的試劑代替本試劑盒中的某單個組分。
8. 為保證結(jié)果準確,每次檢測均需做標準曲線。
磺胺對甲氧嘧分子式:280.31分子量: C11H12N4O3S英文名稱:SulfamethoxydiazineCAS號:651-06-9
2,2'-二吡-6-甲腈分子式:181.2分子量: C11H7N3英文名稱:2,2'- two -6-CAS號:4392-85-2
2,3,6,7,10,11-六羥三亞水合物分子式:324.29分子量: C18H12O6·xH2O英文名稱:2,3,6,7,10,11- six hydroxy Sanya hydrateCAS號:4877-80-9
4,4'-二聯(lián)分子式:202.26分子量: C16H10英文名稱:4,4'- two acetylene baseCAS號:38215-38-2
紫云英苷英文名稱:AstragalinCAS號:480-10-4分子式:448.38分子量:C21H20O11
4-氯-6-(三氟甲)分子式:231.6分子量: C10H5ClF3N英文名稱:4- -6- (three f)CAS號:49713-56-6
7-甲分子式:143.19分子量: C10H9N英文名稱:7- methyl groupCAS號:612-60-2
O,O'-雙(硅烷)-5-氟尿嘧分子式:274.44分子量: C10H19FN2O2Si2英文名稱:O, O'- bis (three methyl silane) -5-CAS號:17242-85-2
奧啉英文名稱:Ao acidCAS號:14698-29-4分子式:261.23分子量: C13H11NO5
半葉素英文名稱:Half leaf elementCAS號:5025-82-1分子式:175.21分子量:C6H9NO3S小鼠 CD8a ELISA配對抗體
小鼠 CD8a ELISA配對抗體
人 FANCG / FAG 基因全長ORF克隆
人 HPN 轉(zhuǎn)錄變體1 基因全長ORF克隆
小鼠 WNT6 基因全長ORF克隆
人 COL10A1 基因全長ORF克隆
小鼠 PARP1 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽
人 SCN2B 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
人 BCAP29 基因全長ORF克隆
小鼠 EPHB1 基因全長ORF克隆
Immunoprecipitation/ IP Kit - Anti-LRPAP1 Immunomagnetic Beads IP 5 mL
小鼠 ACTRIIB / ACVR2B 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
小鼠核因子E2相關(guān)因子2(Nrf2)博湖ELISA試劑盒Rabbit Anti-human IgG/FITC FITC標記的兔抗人IgG 0.3ml
轉(zhuǎn)化生長因子β3(TGFβ3)檢測試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗法) ELISA Kit for Transforming Growth Factor Beta 3 (TGFb3) 規(guī)格:48T/96T 進口、國產(chǎn)
Rabbit Anti-MK IgM/PE-Cy5.5 PE-Cy5.5標記的兔抗猴IgM 0.1ml
溶血磷脂酸受體3(LPAR3)檢測試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗法) ELISA Kit for Lysophosphatidic Acid Receptor 3 (LPAR3) 規(guī)格:48T/96T 進口、國產(chǎn)
Rabbit Anti-pig IgG/Alexa Fluor 555 Alexa Fluor 555標記的兔抗豬IgG 0.1ml
復制啟動因子1(REPIN1)檢測試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗法) ELISA Kit for Replication Initiator 1 (REPIN1) 規(guī)格:48T/96T 進口、國產(chǎn)
Donkey Anti-Goat IgG/Cy7 Cy7標記的驢抗羊IgG 0.1ml
MARCKS相關(guān)蛋白(MARCKSL1)檢測試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗法) ELISA Kit for MARCKS Related Protein (MARCKSL1) 規(guī)格:48T/96T 進口、國產(chǎn)
GABABR1 gamma氨基B型受體1抗體 0.2ml
信號素3A(SEMA3A)檢測試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗法) ELISA Kit for Semaphorin 3A (SEMA3A) 規(guī)格:48T/96T 進口、國產(chǎn)
TNFRSF18/GITR 糖皮質(zhì)誘導腫瘤壞死因子受體抗體 0.2ml
趨化因子C-X-C-基元受體5(CXCR5)檢測試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗法) ELISA Kit for Chemokine C-X-C-Motif Receptor 5 (CXCR5) 規(guī)格:48T/96T 進口、國產(chǎn)