試劑配制:

1、酶聯(lián)板assay plate ：一塊96孔或者48孔。
2、標(biāo)準(zhǔn)品standard：2瓶?jī)龈善贰?br> 3、樣品稀釋液sample diluent：1×20ml/瓶。
4、生物素標(biāo)記抗體稀釋液biotin-antibody diluent：1×10ml/瓶。
5、辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記親和素稀釋液 hrp-avidin diluent：1×10ml/瓶。
6、生物素標(biāo)記抗體biotin-antibody：1×120μl/瓶1：100
7、辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記親和素hrp-avidin：1×120μl/瓶1：100
8、底物溶液tmb e：1×10ml/瓶。
9、濃洗滌液wash buffer：1×20ml/瓶，使用時(shí)每瓶用蒸餾水稀釋25倍。
10、終止液stop solution：1×10ml/瓶2n h2so4。

試劑準(zhǔn)備：
1. 使用前將所有的試劑和標(biāo)本緩慢均衡至室溫(18-25oC)，試劑不能直接在37oC溶解。
2. 標(biāo)準(zhǔn)品(凍干品)：每瓶標(biāo)準(zhǔn)品加入標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液1mL，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解，其濃度為2000pg/mL。準(zhǔn)備7個(gè)稀釋標(biāo)準(zhǔn)品的EP管，每個(gè)EP管中加入150μL的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液，如圖所示依次倍比稀釋成不同的梯度， 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液(0pg/mL)直接作為空白孔。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性，每次實(shí)驗(yàn)請(qǐng)使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。
3. 濃洗滌液：用580mL蒸餾水或去離子水將20mL濃洗滌液稀釋至600mL，進(jìn)行30倍稀釋。

我司主營(yíng)產(chǎn)品之一，產(chǎn)品皆嚴(yán)格按照相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行生產(chǎn)，并經(jīng)過(guò)了嚴(yán)格地反復(fù)地檢測(cè)，我們以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)膽B(tài)度保證產(chǎn)品的質(zhì)量，從而保證您的實(shí)驗(yàn)順利進(jìn)行。產(chǎn)品供貨周期短，供貨及時(shí)，且我司還提供完整的售前和售后服務(wù)。本公司產(chǎn)品僅用于科研。

樣本實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備：
ELISA試劑盒液體樣本：包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清等。
（1）血清
室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
（2）血漿：
應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
（3）尿液：
用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實(shí)行。
（4）細(xì)胞培養(yǎng)上清：
檢測(cè)分泌性的成份時(shí)，用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。
（5）培養(yǎng)細(xì)胞
檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí)，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬(wàn)/ml左右。通過(guò)反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
（6）組織標(biāo)本
切割標(biāo)本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿化。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測(cè)，其余冷凍備用。

注意事項(xiàng)：

1. 試劑盒應(yīng)在有效期內(nèi)使用，請(qǐng)不要使用過(guò)期的試劑。
2. 試劑盒未使用時(shí)應(yīng)保存在 2-8℃冰箱，已復(fù)溶但未用完的標(biāo)準(zhǔn)品，請(qǐng)丟棄。
3. 試劑盒使用前請(qǐng)?jiān)谑覝鼗謴?fù) 30 min，且充分混勻試劑盒里的各種成份及制備的樣品。
4. 在試驗(yàn)中標(biāo)準(zhǔn)品和樣本建議作復(fù)孔檢測(cè)，且加入試劑的順序應(yīng)保持一致。
5. 為避免交叉污染，請(qǐng)?jiān)谠囼?yàn)中使用 1 次性試管，槍頭，封板膜及潔凈塑料容器。
6. 濃縮生物素化抗體和濃縮酶結(jié)合物的體積較少，在運(yùn)輸過(guò)程中微量液體會(huì)沾到管壁及瓶蓋上，使用前請(qǐng)離心處理（5-10 S 即可），使管壁上的液體集中在管底部，取用時(shí)，請(qǐng)用移液器小心吹打幾次。
7. 除了試劑盒中的濃縮洗滌液和終止液可以通用外，請(qǐng)不要使用其他來(lái)源試劑盒內(nèi)含的試劑代替本試劑盒中的某單個(gè)組分。
8. 為保證結(jié)果準(zhǔn)確，每次檢測(cè)均需做標(biāo)準(zhǔn)曲線。

操作流程：
（1）待測(cè)樣品孔中每孔加入待測(cè)樣品100μl，每種樣品設(shè)3個(gè)平行孔；設(shè)兩個(gè)陰性對(duì)照孔，每孔加未處理組的細(xì)胞裂解液100μl；另設(shè)一個(gè)空白對(duì)照孔，加入純細(xì)胞裂解液100μl。 
（2）酶標(biāo)板置4℃，包被過(guò)夜。
（3）洗板：吸干孔內(nèi)反應(yīng)液，用洗滌液過(guò)洗一遍（將洗滌液注滿板孔后，即甩去），之后將洗滌液注滿板孔，浸泡1-2分鐘，間歇搖動(dòng)。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干。重復(fù)洗滌3-4次。
（4）陰性對(duì)照孔每孔加入PBS 50μl，樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。 
（5）酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi)，孵育60min。 
（6）洗板，同（4）。 
（7）每孔加1:5000稀釋的HRP-標(biāo)記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。 
（8）酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi)，孵育60min。 
（9）洗板，同（4）。 
（10）每孔加TMB顯色液 100μl，輕輕混勻10s，置37℃暗處反應(yīng)15-20min。 
（11）每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應(yīng)。 
（12）分別測(cè)450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2，終測(cè)得的OD值為兩者之差（W1-W2），以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。
（13）數(shù)據(jù)處理：在得出標(biāo)本（S）和陰性對(duì)照（N）的 OD值后，計(jì)算S/N值。S/N≥2.1為陽(yáng)性判定標(biāo)準(zhǔn)。
川芎嗪英文名稱：LigustrazineCAS號(hào)：1124-11-4分子式：136.19分子量：C8H12N2

4-羥-5-嘧分子式：121分子量： C5H3N3O英文名稱：4- hydroxy -5- cyano pyrimidineCAS號(hào)：4774-34-9

2-巰-4-(三氟甲)嘧分子式：180.15分子量： C5H3F3N2S英文名稱：2- (three) -4-CAS號(hào)：136547-17-6

2,5-二氟吡分子式：115.08分子量： C5H3F2N英文名稱：2,5- twoCAS號(hào)：84476-99-3

(R)-1-Boc-3-分子式：200.28分子量： C10H20N2O2英文名稱：(R) -1-Boc-3- aminopiperidineCAS號(hào)：188111-79-7

4-氯-2-甲硫-5-乙酯嘧分子式：232.69分子量： C8H9ClN2O2S英文名稱：4- -2- -5- ethyl benzoateCAS號(hào)：5909-24-0

2-溴-3-甲氧吡分子式：188.02分子量： C6H6BrNO英文名稱：2- bromide -3- aCAS號(hào)：24100-18-3

鉻姆沙伯英文名稱：Cr MushaboCAS號(hào)：sfrcv分子式：分子量：

1,2-二甲咪分子式：96.13分子量： C5H8N2英文名稱：1,2- twoCAS號(hào)：1739-84-0

庚烷磺鈉英文名稱：Sodium heptanesulfonateCAS號(hào)：22767-50-6分子式：202.24分子量： C7H15O3SNa人 ADAM12 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)

人 ADAM12 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)

人 CLU 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶His標(biāo)簽

人 ADAP2 基因全長(zhǎng)ORF克隆

人 TMIGD1 基因全長(zhǎng)ORF克隆

人 ITGB1BP1 基因全長(zhǎng)ORF克隆

人 CT45A3 基因全長(zhǎng)ORF克隆

小鼠 Integrin alpha1 基因全長(zhǎng)ORF克隆

人 beta-Catenin / CTNNB1 桿狀病毒-昆蟲(chóng)細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)

人 TRAIL R4 / CD264 / TNFRSF10D ELISA配對(duì)抗體

人 COQ7 ELISA配對(duì)抗體

小鼠 LGMN 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)

小鼠疊氮胸苷(AZT)博湖ELISA試劑盒LIR-6  白細(xì)胞球蛋白樣受體6抗體 0.2ml

白介素10(IL10)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗(yàn)法)    ELISA Kit for Interleukin 10 (IL10)    規(guī)格：48T/96T 進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)

MATH1  腸道分化干細(xì)胞MATH-1蛋白抗體 0.1ml

骨橋素(OPN)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗(yàn)法)    ELISA Kit for Osteopontin (OPN)    規(guī)格：48T/96T 進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)

phospho-alpha Adducin(Ser726)  磷酸化內(nèi)收蛋白a1抗體 0.1ml

脂聯(lián)素(ADP)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗(yàn)法)    ELISA Kit for Adiponectin (ADP)    規(guī)格：48T/96T 進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)

Phospho-mTOR (Tyr144)  磷酸化雷帕霉素靶蛋白抗體 0.1ml

生長(zhǎng)(GH)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗(yàn)法)    ELISA Kit for Growth Hormone (GH)    規(guī)格：48T/96T 進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)

phospho-NFATc2(Ser326)  磷酸化核因子活化T細(xì)胞胞漿蛋白2抗體 0.1ml

基質(zhì)金屬蛋白酶3(MMP3)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗(yàn)法)    ELISA Kit for Matrix Metalloproteinase 3 (MMP3)    規(guī)格：48T/96T 進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)

phospho-Nrf2 (Ser40)  磷酸化核因子2相關(guān)因子2(Ser40)抗體 0.1ml

組織型纖溶酶原激活因子(tPA)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗(yàn)法)    ELISA Kit for Plasmigen Activator, Tissue (tPA)    規(guī)格：48T/96T 進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)