試劑配制:

1、酶聯(lián)板assay plate ：一塊96孔或者48孔。
2、標(biāo)準(zhǔn)品standard：2瓶凍干品。
3、樣品稀釋液sample diluent：1×20ml/瓶。
4、生物素標(biāo)記抗體稀釋液biotin-antibody diluent：1×10ml/瓶。
5、辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素稀釋液 hrp-avidin diluent：1×10ml/瓶。
6、生物素標(biāo)記抗體biotin-antibody：1×120μl/瓶1：100
7、辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素hrp-avidin：1×120μl/瓶1：100
8、底物溶液tmb e：1×10ml/瓶。
9、濃洗滌液wash buffer：1×20ml/瓶，使用時每瓶用蒸餾水稀釋25倍。
10、終止液stop solution：1×10ml/瓶2n h2so4。

試劑準(zhǔn)備：
1. 使用前將所有的試劑和標(biāo)本緩慢均衡至室溫(18-25oC)，試劑不能直接在37oC溶解。
2. 標(biāo)準(zhǔn)品(凍干品)：每瓶標(biāo)準(zhǔn)品加入標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液1mL，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時反復(fù)顛倒/搓動以助溶解，其濃度為2000pg/mL。準(zhǔn)備7個稀釋標(biāo)準(zhǔn)品的EP管，每個EP管中加入150μL的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液，如圖所示依次倍比稀釋成不同的梯度， 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液(0pg/mL)直接作為空白孔。為保證實驗結(jié)果有效性，每次實驗請使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。
3. 濃洗滌液：用580mL蒸餾水或去離子水將20mL濃洗滌液稀釋至600mL，進(jìn)行30倍稀釋。

我司主營產(chǎn)品之一，產(chǎn)品皆嚴(yán)格按照相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行生產(chǎn)，并經(jīng)過了嚴(yán)格地反復(fù)地檢測，我們以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)膽B(tài)度保證產(chǎn)品的質(zhì)量，從而保證您的實驗順利進(jìn)行。產(chǎn)品供貨周期短，供貨及時，且我司還提供完整的售前和售后服務(wù)。本公司產(chǎn)品僅用于科研。

樣本實驗前準(zhǔn)備：
ELISA試劑盒液體樣本：包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清等。
（1）血清
室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
（2）血漿：
應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
（3）尿液：
用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實行。
（4）細(xì)胞培養(yǎng)上清：
檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。
（5）培養(yǎng)細(xì)胞
檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
（6）組織標(biāo)本
切割標(biāo)本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿化。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。

注意事項：

1. 試劑盒應(yīng)在有效期內(nèi)使用，請不要使用過期的試劑。
2. 試劑盒未使用時應(yīng)保存在 2-8℃冰箱，已復(fù)溶但未用完的標(biāo)準(zhǔn)品，請丟棄。
3. 試劑盒使用前請在室溫恢復(fù) 30 min，且充分混勻試劑盒里的各種成份及制備的樣品。
4. 在試驗中標(biāo)準(zhǔn)品和樣本建議作復(fù)孔檢測，且加入試劑的順序應(yīng)保持一致。
5. 為避免交叉污染，請在試驗中使用 1 次性試管，槍頭，封板膜及潔凈塑料容器。
6. 濃縮生物素化抗體和濃縮酶結(jié)合物的體積較少，在運輸過程中微量液體會沾到管壁及瓶蓋上，使用前請離心處理（5-10 S 即可），使管壁上的液體集中在管底部，取用時，請用移液器小心吹打幾次。
7. 除了試劑盒中的濃縮洗滌液和終止液可以通用外，請不要使用其他來源試劑盒內(nèi)含的試劑代替本試劑盒中的某單個組分。
8. 為保證結(jié)果準(zhǔn)確，每次檢測均需做標(biāo)準(zhǔn)曲線。

操作流程：
（1）待測樣品孔中每孔加入待測樣品100μl，每種樣品設(shè)3個平行孔；設(shè)兩個陰性對照孔，每孔加未處理組的細(xì)胞裂解液100μl；另設(shè)一個空白對照孔，加入純細(xì)胞裂解液100μl。 
（2）酶標(biāo)板置4℃，包被過夜。
（3）洗板：吸干孔內(nèi)反應(yīng)液，用洗滌液過洗一遍（將洗滌液注滿板孔后，即甩去），之后將洗滌液注滿板孔，浸泡1-2分鐘，間歇搖動。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干。重復(fù)洗滌3-4次。
（4）陰性對照孔每孔加入PBS 50μl，樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。 
（5）酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi)，孵育60min。 
（6）洗板，同（4）。 
（7）每孔加1:5000稀釋的HRP-標(biāo)記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。 
（8）酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi)，孵育60min。 
（9）洗板，同（4）。 
（10）每孔加TMB顯色液 100μl，輕輕混勻10s，置37℃暗處反應(yīng)15-20min。 
（11）每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應(yīng)。 
（12）分別測450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2，終測得的OD值為兩者之差（W1-W2），以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。
（13）數(shù)據(jù)處理：在得出標(biāo)本（S）和陰性對照（N）的 OD值后，計算S/N值。S/N≥2.1為陽性判定標(biāo)準(zhǔn)。
4，5-二嘧分子式：110.12分子量： C4H6N4英文名稱：4, 5- twoCAS號：13754-19-3

1-甲-4-碘吡分子式：208分子量： C4H5IN2英文名稱：1甲- 4 -碘吡CAS號：39806-90-1

1,4-二(3-甲氧氧)分子式：322.36分子量： C20H18O4英文名稱：1,4- two (3- a) benzeneCAS號：5024-84-0

奧硝分子式： 219,63分子量： C7H10CIN3O3英文名稱：The OrdovicianCAS號：16773-42-5

2-甲-5-溴吡分子式：172.02分子量： C6H6BrN英文名稱：2- methyl -5-CAS號：3430-13-5

5-溴-2-氟吡分子式：175.99分子量： C5H3BrFN英文名稱：5- bromide -2-CAS號：766-11-0

3,4,5-三氯吡分子式：182.44分子量： C5H2Cl3N英文名稱：3,4,5- threeCAS號：33216-52-3

氯1,3-二甲咪分子式：132.59分子量： C5H9ClN2英文名稱：Chlorinated 1,3- twoCAS號：79917-88-7

布康分子式：474.79分子量： C19H18Cl3N3O3S英文名稱：Nitric acidCAS號：64872-77-1

戊醛2,4-二硝分子式：266.25分子量： C11H14N4O4英文名稱：4-dinitrophenylhydrazine aldehyde 2,4- twoCAS號：2057-84-3人 IMPA1 基因全長ORF克隆

人 IMPA1 基因全長ORF克隆

人 EIF2S1 基因全長ORF克隆

人 ERMAP 基因全長ORF克隆

人 QPRT 基因全長ORF克隆

人 TNFRSF14 / HVEA / HVEM 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)

小鼠 PSMB6 基因全長ORF克隆

大鼠 WDPCP 基因全長ORF克隆

人 EIF4G1 基因全長ORF克隆

大鼠 SLC11A2 基因全長ORF克隆

人 ITGA3 基因全長ORF克隆

人 PD1 / PDCD1 基因全長ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶His標(biāo)簽

小鼠催產(chǎn)素(OT)博湖ELISA試劑盒Donkey Anti-human IgG  驢抗人IgG 1mg

細(xì)胞周期素D3(CCND3)檢測試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗法)    ELISA Kit for Cyclin D3 (CCND3)    規(guī)格：48T/96T 進(jìn)口、國產(chǎn)

Goat Anti-rat IgG/PE-Cy3  PE-Cy3標(biāo)記的羊抗大鼠IgG 0.1ml

前動力蛋白受體2(PKR2)檢測試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗法)    ELISA Kit for Prokineticin Receptor 2 (PKR2)    規(guī)格：48T/96T 進(jìn)口、國產(chǎn)

Goat Anti-human IgM/PE-Cy7  PE-Cy7標(biāo)記的羊抗人IgM 0.1ml

骨橋素(OPN)檢測試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗法)    ELISA Kit for Osteopontin (OPN)    規(guī)格：48T/96T 進(jìn)口、國產(chǎn)

Mouse Anti-rat IgG/PE-Cy3  PE-Cy3標(biāo)記的小鼠抗大鼠IgG 0.1ml

心肌營養(yǎng)素1(CT1)檢測試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗法)    ELISA Kit for Cardiotrophin 1 (CT1)    規(guī)格：48T/96T 進(jìn)口、國產(chǎn)

Rabbit Anti-Bov IgG/PE-Cy5.5  PE-Cy5.5標(biāo)記的兔抗牛IgG  0.1ml

蛋白激酶抑制因子γ(PKIγ)檢測試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗法)    ELISA Kit for Protein Kinase Inhibitor Gamma (PKIg)    規(guī)格：48T/96T 進(jìn)口、國產(chǎn)

Rabbit Anti-Goat IgM/Cy5  Cy5標(biāo)記的兔抗羊IgM 0.1ml

血清淀粉樣蛋白A(SAA)檢測試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗法)    ELISA Kit for Serum Amyloid A (SAA)    規(guī)格：48T/96T 進(jìn)口、國產(chǎn)