試劑配制:

1、酶聯(lián)板assay plate ：一塊96孔或者48孔。
2、標(biāo)準(zhǔn)品standard：2瓶凍干品。
3、樣品稀釋液sample diluent：1×20ml/瓶。
4、生物素標(biāo)記抗體稀釋液biotin-antibody diluent：1×10ml/瓶。
5、辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素稀釋液 hrp-avidin diluent：1×10ml/瓶。
6、生物素標(biāo)記抗體biotin-antibody：1×120μl/瓶1：100
7、辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素hrp-avidin：1×120μl/瓶1：100
8、底物溶液tmb e：1×10ml/瓶。
9、濃洗滌液wash buffer：1×20ml/瓶，使用時(shí)每瓶用蒸餾水稀釋25倍。
10、終止液stop solution：1×10ml/瓶2n h2so4。

試劑準(zhǔn)備：
1. 使用前將所有的試劑和標(biāo)本緩慢均衡至室溫(18-25oC)，試劑不能直接在37oC溶解。
2. 標(biāo)準(zhǔn)品(凍干品)：每瓶標(biāo)準(zhǔn)品加入標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液1mL，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解，其濃度為2000pg/mL。準(zhǔn)備7個(gè)稀釋標(biāo)準(zhǔn)品的EP管，每個(gè)EP管中加入150μL的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液，如圖所示依次倍比稀釋成不同的梯度， 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液(0pg/mL)直接作為空白孔。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性，每次實(shí)驗(yàn)請使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。
3. 濃洗滌液：用580mL蒸餾水或去離子水將20mL濃洗滌液稀釋至600mL，進(jìn)行30倍稀釋。

我司主營產(chǎn)品之一，產(chǎn)品皆嚴(yán)格按照相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行生產(chǎn)，并經(jīng)過了嚴(yán)格地反復(fù)地檢測，我們以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)膽B(tài)度保證產(chǎn)品的質(zhì)量，從而保證您的實(shí)驗(yàn)順利進(jìn)行。產(chǎn)品供貨周期短，供貨及時(shí)，且我司還提供完整的售前和售后服務(wù)。本公司產(chǎn)品僅用于科研。

樣本實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備：
ELISA試劑盒液體樣本：包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清等。
（1）血清
室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
（2）血漿：
應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
（3）尿液：
用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實(shí)行。
（4）細(xì)胞培養(yǎng)上清：
檢測分泌性的成份時(shí)，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。
（5）培養(yǎng)細(xì)胞
檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí)，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
（6）組織標(biāo)本
切割標(biāo)本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿化。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。

注意事項(xiàng)：

1. 試劑盒應(yīng)在有效期內(nèi)使用，請不要使用過期的試劑。
2. 試劑盒未使用時(shí)應(yīng)保存在 2-8℃冰箱，已復(fù)溶但未用完的標(biāo)準(zhǔn)品，請丟棄。
3. 試劑盒使用前請?jiān)谑覝鼗謴?fù) 30 min，且充分混勻試劑盒里的各種成份及制備的樣品。
4. 在試驗(yàn)中標(biāo)準(zhǔn)品和樣本建議作復(fù)孔檢測，且加入試劑的順序應(yīng)保持一致。
5. 為避免交叉污染，請?jiān)谠囼?yàn)中使用 1 次性試管，槍頭，封板膜及潔凈塑料容器。
6. 濃縮生物素化抗體和濃縮酶結(jié)合物的體積較少，在運(yùn)輸過程中微量液體會(huì)沾到管壁及瓶蓋上，使用前請離心處理（5-10 S 即可），使管壁上的液體集中在管底部，取用時(shí)，請用移液器小心吹打幾次。
7. 除了試劑盒中的濃縮洗滌液和終止液可以通用外，請不要使用其他來源試劑盒內(nèi)含的試劑代替本試劑盒中的某單個(gè)組分。
8. 為保證結(jié)果準(zhǔn)確，每次檢測均需做標(biāo)準(zhǔn)曲線。

操作流程：
（1）待測樣品孔中每孔加入待測樣品100μl，每種樣品設(shè)3個(gè)平行孔；設(shè)兩個(gè)陰性對(duì)照孔，每孔加未處理組的細(xì)胞裂解液100μl；另設(shè)一個(gè)空白對(duì)照孔，加入純細(xì)胞裂解液100μl。 
（2）酶標(biāo)板置4℃，包被過夜。
（3）洗板：吸干孔內(nèi)反應(yīng)液，用洗滌液過洗一遍（將洗滌液注滿板孔后，即甩去），之后將洗滌液注滿板孔，浸泡1-2分鐘，間歇搖動(dòng)。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干。重復(fù)洗滌3-4次。
（4）陰性對(duì)照孔每孔加入PBS 50μl，樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。 
（5）酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi)，孵育60min。 
（6）洗板，同（4）。 
（7）每孔加1:5000稀釋的HRP-標(biāo)記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。 
（8）酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi)，孵育60min。 
（9）洗板，同（4）。 
（10）每孔加TMB顯色液 100μl，輕輕混勻10s，置37℃暗處反應(yīng)15-20min。 
（11）每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應(yīng)。 
（12）分別測450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2，終測得的OD值為兩者之差（W1-W2），以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。
（13）數(shù)據(jù)處理：在得出標(biāo)本（S）和陰性對(duì)照（N）的 OD值后，計(jì)算S/N值。S/N≥2.1為陽性判定標(biāo)準(zhǔn)。
二氫異并分子式：120.15分子量： C8H8O英文名稱：Two hydrogen ISOCAS號(hào)：496-14-0

3--9-乙咔(AEC)英文名稱：3- -9- (AEC) - ethylcarbazoleCAS號(hào)：132-32-1分子式：210.28分子量： C14H14N2

亞甲藍(lán)(無水)英文名稱：Methylene blue (anhydrous)CAS號(hào)：61-73-4分子式：319.85分子量： C16H18ClN3S

間氯三氟甲分子式：180.55分子量： C7H4ClF3英文名稱：Between three fCAS號(hào)：98-15-7

氘代對(duì)二甲-d{10}分子式：116.23分子量： C8D10英文名稱：Deuterated xylene -d{10}CAS號(hào)：41051-88-1

1-碘異分子式：255.06分子量： C9H6IN英文名稱：1- iodideCAS號(hào)：19658-77-6

R-效分子式：291.78分子量： C15H18ClN3O英文名稱：R-.CAS號(hào)：83657-16-3

4,4’-雙[2-(2-甲氧)亞乙]-1,1’-聯(lián)分子式：418.53分子量： C30H26O2英文名稱：4,4 '- bis]-1,1 (2-, [2-, phenyl group), ethylCAS號(hào)：40470-68-6

原甲三乙酯英文名稱：Three ethyl acetateCAS號(hào)：122-51-0分子式：148.2分子量： C7H16O3

4,4'-二溴-2,2'-聯(lián)吡分子式：313.98分子量： C10H6Br2N2英文名稱：4,4'- dibromo -2,2'- bipyridineCAS號(hào)：18511-71-2人 ITGA5 & ITGB6 Heterodimer 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) (變性)

人 ITGA5 & ITGB6 Heterodimer 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) (變性)

人 PPARA 基因全長ORF克隆 (表達(dá)載體), 無標(biāo)簽

人 CD25 / IL2Rα 基因全長ORF克隆

人 Neuroligin-3 / NLGN3 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) (變性)

人 CD38 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) (變性)

小鼠 SDF2 / SDF-2 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) (變性)

大鼠 SERPINF2 基因全長ORF克隆

大鼠 IFNGR1 基因全長ORF克隆

重組小鼠 PIGF / PLGF 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)

人 FLI1 基因全長ORF克隆

Immunoprecipitation/ IP Kit - Anti-Fibronectin Immunomagnetic Beads IP    5 mL

小鼠白介素1α(IL-1α)博湖ELISA試劑盒Goat Anti-rat IgG/Alexa Fluor 647  Alexa Fluor 647標(biāo)記的羊抗大鼠IgG 0.1ml

糖合酶3(CHSY3)檢測試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗(yàn)法)    ELISA Kit for Carbohydrate Synthase 3 (CHSY3)    規(guī)格：48T/96T 進(jìn)口、國產(chǎn)

Mouse Anti-human IgG/PE-Cy7  PE-Cy7標(biāo)記的小鼠抗人IgG 0.1ml

矢車菊苷β1(CENTβ1)檢測試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗(yàn)法)    ELISA Kit for Centaurin Beta 1 (CENTb1)    規(guī)格：48T/96T 進(jìn)口、國產(chǎn)

Mouse Anti-rat IgG/Bio  生物素標(biāo)記的小鼠抗大鼠IgG 0.1ml

腎結(jié)核蛋白4(NPHP4)檢測試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗(yàn)法)    ELISA Kit for Nephrophthisis 4 (NPHP4)    規(guī)格：48T/96T 進(jìn)口、國產(chǎn)

Rabbit Anti-Bovine IgM/Gold  膠體金標(biāo)記的兔抗牛IgM 2ml

連續(xù)蛋白(TELE)檢測試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗(yàn)法)    ELISA Kit for Telethonin (TELE)    規(guī)格：48T/96T 進(jìn)口、國產(chǎn)

Rabbit Anti-Goat IgM/RBITC  羅丹明標(biāo)記的兔抗羊IgM 0.3ml

琥珀酸受體1(SUCNR1)檢測試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗(yàn)法)    ELISA Kit for Succinate Receptor 1 (SUCNR1)    規(guī)格：48T/96T 進(jìn)口、國產(chǎn)

Rabbit Anti-human sIgA/PE-Cy3  PE-Cy3標(biāo)記的兔抗人分泌型IgA 0.1ml

夜盲蛋白(NYX)檢測試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗(yàn)法)    ELISA Kit for Nyctalopin (NYX)    規(guī)格：48T/96T 進(jìn)口、國產(chǎn)