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試劑配制:
1、酶聯(lián)板assay plate :一塊96孔或者48孔。
2、標(biāo)準(zhǔn)品standard:2瓶凍干品。
3、樣品稀釋液sample diluent:1×20ml/瓶。
4、生物素標(biāo)記抗體稀釋液biotin-antibody diluent:1×10ml/瓶。
5、辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素稀釋液 hrp-avidin diluent:1×10ml/瓶。
6、生物素標(biāo)記抗體biotin-antibody:1×120μl/瓶1:100
7、辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素hrp-avidin:1×120μl/瓶1:100
8、底物溶液tmb e:1×10ml/瓶。
9、濃洗滌液wash buffer:1×20ml/瓶,使用時(shí)每瓶用蒸餾水稀釋25倍。
10、終止液stop solution:1×10ml/瓶2n h2so4。
試劑準(zhǔn)備:
1. 使用前將所有的試劑和標(biāo)本緩慢均衡至室溫(18-25oC),試劑不能直接在37oC溶解。
2. 標(biāo)準(zhǔn)品(凍干品):每瓶標(biāo)準(zhǔn)品加入標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液1mL,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解,其濃度為2000pg/mL。準(zhǔn)備7個(gè)稀釋標(biāo)準(zhǔn)品的EP管,每個(gè)EP管中加入150μL的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液,如圖所示依次倍比稀釋成不同的梯度, 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液(0pg/mL)直接作為空白孔。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性,每次實(shí)驗(yàn)請使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。
3. 濃洗滌液:用580mL蒸餾水或去離子水將20mL濃洗滌液稀釋至600mL,進(jìn)行30倍稀釋。
我司主營產(chǎn)品之一,產(chǎn)品皆嚴(yán)格按照相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行生產(chǎn),并經(jīng)過了嚴(yán)格地反復(fù)地檢測,我們以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)膽B(tài)度保證產(chǎn)品的質(zhì)量,從而保證您的實(shí)驗(yàn)順利進(jìn)行。產(chǎn)品供貨周期短,供貨及時(shí),且我司還提供完整的售前和售后服務(wù)。本公司產(chǎn)品僅用于科研。
產(chǎn)品名稱 |
小鼠白介素1α(IL-1α)博湖ELISA試劑盒 |
英文名稱 |
Mouse Interleukin 1α,IL-1α ELISA Kit |
貨號(hào) |
PM104422 |
樣本實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備:
ELISA試劑盒液體樣本:包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清等。
(1)血清
室溫血液自然凝固10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
(2)血漿:
應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
(3)尿液:
用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實(shí)行。
(4)細(xì)胞培養(yǎng)上清:
檢測分泌性的成份時(shí),用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。
(5)培養(yǎng)細(xì)胞
檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí),用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑,以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
(6)組織標(biāo)本
切割標(biāo)本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿化。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。
注意事項(xiàng):
1. 試劑盒應(yīng)在有效期內(nèi)使用,請不要使用過期的試劑。
2. 試劑盒未使用時(shí)應(yīng)保存在 2-8℃冰箱,已復(fù)溶但未用完的標(biāo)準(zhǔn)品,請丟棄。
3. 試劑盒使用前請?jiān)谑覝鼗謴?fù) 30 min,且充分混勻試劑盒里的各種成份及制備的樣品。
4. 在試驗(yàn)中標(biāo)準(zhǔn)品和樣本建議作復(fù)孔檢測,且加入試劑的順序應(yīng)保持一致。
5. 為避免交叉污染,請?jiān)谠囼?yàn)中使用 1 次性試管,槍頭,封板膜及潔凈塑料容器。
6. 濃縮生物素化抗體和濃縮酶結(jié)合物的體積較少,在運(yùn)輸過程中微量液體會(huì)沾到管壁及瓶蓋上,使用前請離心處理(5-10 S 即可),使管壁上的液體集中在管底部,取用時(shí),請用移液器小心吹打幾次。
7. 除了試劑盒中的濃縮洗滌液和終止液可以通用外,請不要使用其他來源試劑盒內(nèi)含的試劑代替本試劑盒中的某單個(gè)組分。
8. 為保證結(jié)果準(zhǔn)確,每次檢測均需做標(biāo)準(zhǔn)曲線。
操作流程:
(1)待測樣品孔中每孔加入待測樣品100μl,每種樣品設(shè)3個(gè)平行孔;設(shè)兩個(gè)陰性對(duì)照孔,每孔加未處理組的細(xì)胞裂解液100μl;另設(shè)一個(gè)空白對(duì)照孔,加入純細(xì)胞裂解液100μl。
(2)酶標(biāo)板置4℃,包被過夜。
(3)洗板:吸干孔內(nèi)反應(yīng)液,用洗滌液過洗一遍(將洗滌液注滿板孔后,即甩去),之后將洗滌液注滿板孔,浸泡1-2分鐘,間歇搖動(dòng)。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干。重復(fù)洗滌3-4次。
(4)陰性對(duì)照孔每孔加入PBS 50μl,樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。
(5)酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),孵育60min。
(6)洗板,同(4)。
(7)每孔加1:5000稀釋的HRP-標(biāo)記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。
(8)酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),孵育60min。
(9)洗板,同(4)。
(10)每孔加TMB顯色液 100μl,輕輕混勻10s,置37℃暗處反應(yīng)15-20min。
(11)每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應(yīng)。
(12)分別測450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2,終測得的OD值為兩者之差(W1-W2),以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。
(13)數(shù)據(jù)處理:在得出標(biāo)本(S)和陰性對(duì)照(N)的 OD值后,計(jì)算S/N值。S/N≥2.1為陽性判定標(biāo)準(zhǔn)。
二氫異并分子式:120.15分子量: C8H8O英文名稱:Two hydrogen ISOCAS號(hào):496-14-0
3--9-乙咔(AEC)英文名稱:3- -9- (AEC) - ethylcarbazoleCAS號(hào):132-32-1分子式:210.28分子量: C14H14N2
亞甲藍(lán)(無水)英文名稱:Methylene blue (anhydrous)CAS號(hào):61-73-4分子式:319.85分子量: C16H18ClN3S
間氯三氟甲分子式:180.55分子量: C7H4ClF3英文名稱:Between three fCAS號(hào):98-15-7
氘代對(duì)二甲-d{10}分子式:116.23分子量: C8D10英文名稱:Deuterated xylene -d{10}CAS號(hào):41051-88-1
1-碘異分子式:255.06分子量: C9H6IN英文名稱:1- iodideCAS號(hào):19658-77-6
R-效分子式:291.78分子量: C15H18ClN3O英文名稱:R-.CAS號(hào):83657-16-3
4,4’-雙[2-(2-甲氧)亞乙]-1,1’-聯(lián)分子式:418.53分子量: C30H26O2英文名稱:4,4 '- bis]-1,1 (2-, [2-, phenyl group), ethylCAS號(hào):40470-68-6
原甲三乙酯英文名稱:Three ethyl acetateCAS號(hào):122-51-0分子式:148.2分子量: C7H16O3
4,4'-二溴-2,2'-聯(lián)吡分子式:313.98分子量: C10H6Br2N2英文名稱:4,4'- dibromo -2,2'- bipyridineCAS號(hào):18511-71-2人 ITGA5 & ITGB6 Heterodimer 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) (變性)
人 ITGA5 & ITGB6 Heterodimer 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) (變性)
人 PPARA 基因全長ORF克隆 (表達(dá)載體), 無標(biāo)簽
人 CD25 / IL2Rα 基因全長ORF克隆
人 Neuroligin-3 / NLGN3 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) (變性)
人 CD38 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) (變性)
小鼠 SDF2 / SDF-2 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) (變性)
大鼠 SERPINF2 基因全長ORF克隆
大鼠 IFNGR1 基因全長ORF克隆
重組小鼠 PIGF / PLGF 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)
人 FLI1 基因全長ORF克隆
Immunoprecipitation/ IP Kit - Anti-Fibronectin Immunomagnetic Beads IP 5 mL
小鼠白介素1α(IL-1α)博湖ELISA試劑盒Goat Anti-rat IgG/Alexa Fluor 647 Alexa Fluor 647標(biāo)記的羊抗大鼠IgG 0.1ml
糖合酶3(CHSY3)檢測試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Carbohydrate Synthase 3 (CHSY3) 規(guī)格:48T/96T 進(jìn)口、國產(chǎn)
Mouse Anti-human IgG/PE-Cy7 PE-Cy7標(biāo)記的小鼠抗人IgG 0.1ml
矢車菊苷β1(CENTβ1)檢測試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Centaurin Beta 1 (CENTb1) 規(guī)格:48T/96T 進(jìn)口、國產(chǎn)
Mouse Anti-rat IgG/Bio 生物素標(biāo)記的小鼠抗大鼠IgG 0.1ml
腎結(jié)核蛋白4(NPHP4)檢測試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Nephrophthisis 4 (NPHP4) 規(guī)格:48T/96T 進(jìn)口、國產(chǎn)
Rabbit Anti-Bovine IgM/Gold 膠體金標(biāo)記的兔抗牛IgM 2ml
連續(xù)蛋白(TELE)檢測試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Telethonin (TELE) 規(guī)格:48T/96T 進(jìn)口、國產(chǎn)
Rabbit Anti-Goat IgM/RBITC 羅丹明標(biāo)記的兔抗羊IgM 0.3ml
琥珀酸受體1(SUCNR1)檢測試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Succinate Receptor 1 (SUCNR1) 規(guī)格:48T/96T 進(jìn)口、國產(chǎn)
Rabbit Anti-human sIgA/PE-Cy3 PE-Cy3標(biāo)記的兔抗人分泌型IgA 0.1ml
夜盲蛋白(NYX)檢測試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Nyctalopin (NYX) 規(guī)格:48T/96T 進(jìn)口、國產(chǎn)