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試劑配制:
1、酶聯(lián)板assay plate :一塊96孔或者48孔。
2、標(biāo)準(zhǔn)品standard:2瓶凍干品。
3、樣品稀釋液sample diluent:1×20ml/瓶。
4、生物素標(biāo)記抗體稀釋液biotin-antibody diluent:1×10ml/瓶。
5、辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素稀釋液 hrp-avidin diluent:1×10ml/瓶。
6、生物素標(biāo)記抗體biotin-antibody:1×120μl/瓶1:100
7、辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素hrp-avidin:1×120μl/瓶1:100
8、底物溶液tmb e:1×10ml/瓶。
9、濃洗滌液wash buffer:1×20ml/瓶,使用時每瓶用蒸餾水稀釋25倍。
10、終止液stop solution:1×10ml/瓶2n h2so4。
試劑準(zhǔn)備:
1. 使用前將所有的試劑和標(biāo)本緩慢均衡至室溫(18-25oC),試劑不能直接在37oC溶解。
2. 標(biāo)準(zhǔn)品(凍干品):每瓶標(biāo)準(zhǔn)品加入標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液1mL,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復(fù)顛倒/搓動以助溶解,其濃度為2000pg/mL。準(zhǔn)備7個稀釋標(biāo)準(zhǔn)品的EP管,每個EP管中加入150μL的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液,如圖所示依次倍比稀釋成不同的梯度, 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液(0pg/mL)直接作為空白孔。為保證實驗結(jié)果有效性,每次實驗請使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。
3. 濃洗滌液:用580mL蒸餾水或去離子水將20mL濃洗滌液稀釋至600mL,進行30倍稀釋。
我司主營產(chǎn)品之一,產(chǎn)品皆嚴(yán)格按照相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)進行生產(chǎn),并經(jīng)過了嚴(yán)格地反復(fù)地檢測,我們以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)膽B(tài)度保證產(chǎn)品的質(zhì)量,從而保證您的實驗順利進行。產(chǎn)品供貨周期短,供貨及時,且我司還提供完整的售前和售后服務(wù)。本公司產(chǎn)品僅用于科研。
產(chǎn)品名稱 |
小鼠粘蛋白4(MUC4)博湖ELISA試劑盒 |
英文名稱 |
Mouse Mucin 4(MUC4)ELISA Kit |
貨號 |
PM104758 |
樣本實驗前準(zhǔn)備:
ELISA試劑盒液體樣本:包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養(yǎng)上清等。
(1)血清
室溫血液自然凝固10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
(2)血漿:
應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
(3)尿液:
用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實行。
(4)細胞培養(yǎng)上清:
檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。
(5)培養(yǎng)細胞
檢測細胞內(nèi)的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑,以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
(6)組織標(biāo)本
切割標(biāo)本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿化。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。
圖4
注意事項:
1. 試劑盒應(yīng)在有效期內(nèi)使用,請不要使用過期的試劑。
2. 試劑盒未使用時應(yīng)保存在 2-8℃冰箱,已復(fù)溶但未用完的標(biāo)準(zhǔn)品,請丟棄。
3. 試劑盒使用前請在室溫恢復(fù) 30 min,且充分混勻試劑盒里的各種成份及制備的樣品。
4. 在試驗中標(biāo)準(zhǔn)品和樣本建議作復(fù)孔檢測,且加入試劑的順序應(yīng)保持一致。
5. 為避免交叉污染,請在試驗中使用 1 次性試管,槍頭,封板膜及潔凈塑料容器。
6. 濃縮生物素化抗體和濃縮酶結(jié)合物的體積較少,在運輸過程中微量液體會沾到管壁及瓶蓋上,使用前請離心處理(5-10 S 即可),使管壁上的液體集中在管底部,取用時,請用移液器小心吹打幾次。
7. 除了試劑盒中的濃縮洗滌液和終止液可以通用外,請不要使用其他來源試劑盒內(nèi)含的試劑代替本試劑盒中的某單個組分。
8. 為保證結(jié)果準(zhǔn)確,每次檢測均需做標(biāo)準(zhǔn)曲線。
操作流程:
(1)待測樣品孔中每孔加入待測樣品100μl,每種樣品設(shè)3個平行孔;設(shè)兩個陰性對照孔,每孔加未處理組的細胞裂解液100μl;另設(shè)一個空白對照孔,加入純細胞裂解液100μl。
(2)酶標(biāo)板置4℃,包被過夜。
(3)洗板:吸干孔內(nèi)反應(yīng)液,用洗滌液過洗一遍(將洗滌液注滿板孔后,即甩去),之后將洗滌液注滿板孔,浸泡1-2分鐘,間歇搖動。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干。重復(fù)洗滌3-4次。
(4)陰性對照孔每孔加入PBS 50μl,樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。
(5)酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),孵育60min。
(6)洗板,同(4)。
(7)每孔加1:5000稀釋的HRP-標(biāo)記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。
(8)酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),孵育60min。
(9)洗板,同(4)。
(10)每孔加TMB顯色液 100μl,輕輕混勻10s,置37℃暗處反應(yīng)15-20min。
(11)每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應(yīng)。
(12)分別測450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2,終測得的OD值為兩者之差(W1-W2),以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。
(13)數(shù)據(jù)處理:在得出標(biāo)本(S)和陰性對照(N)的 OD值后,計算S/N值。S/N≥2.1為陽性判定標(biāo)準(zhǔn)。
膽紅素 英文名稱 含量測定 規(guī)格: 20mg/支進口/國產(chǎn)
牛蒡子苷 英文名稱 Arctiin 規(guī)格: 20mg/支進口/國產(chǎn) 含量: ≥98%
鹽酸替羅非班 英文名稱 HPLC法含量測定 規(guī)格: 20mg/支進口/國產(chǎn)
麝香 英文名稱 中藥對照藥材 規(guī)格: 20mg/支進口/國產(chǎn) 含量: TLC法鑒別
地膚子皂苷 Ic 英文名稱 對照品 規(guī)格: 20mg/支進口/國產(chǎn) 含量: 含量測定
葛根(甘葛藤) 英文名稱 TLC法鑒別 規(guī)格: 20mg/支進口/國產(chǎn)
總銀杏酸
(C13:0,C15:1,C17:2,C15:0,C17:1) 英文名稱 Ginkgolic Acids
(C13:0,C15:1,C17:2,C15:0,C17:1) 規(guī)格: 20mg/支進口/國產(chǎn) 含量: ≥99%
β- 蛻皮甾酮 英文名稱 β-Ecdysone 規(guī)格: 20mg/支進口/國產(chǎn) 含量: ≥98%
谷胱甘肽 英文名稱 含量測定 規(guī)格: 20mg/支進口/國產(chǎn)
3-甲基利福霉素 SV 英文名稱 檢查 規(guī)格: 20mg/支進口/國產(chǎn)
亞油酸甲酯 英文名稱 含量測定 規(guī)格: 20mg/支進口/國產(chǎn) Immunoprecipitation/IP Kit-Immunomagnetic Beads Protein A 5 mL
Immunoprecipitation/IP Kit-Immunomagnetic Beads Protein A 5 mL
Immunoprecipitation/IP Kit- Myc Tag Immunomagnetic Beads 5 mL
小鼠 ALK-6 / BMPR-IB 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標(biāo)簽
INTS12 基因全長ORF克隆
NME1 基因全長ORF克隆
ZWINT 基因全長ORF克隆
小鼠 SIRT5 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶Myc標(biāo)簽
GDF-3 基因全長ORF克隆
小鼠 Angiopoietin-like1 基因全長ORF克隆
小鼠 OXSR1 / OSR1 基因全長ORF克隆
小鼠 CD69 基因全長ORF克隆
小鼠粘蛋白4(MUC4)博湖ELISA試劑盒肝炎病毒X蛋白(HBxAg)C端抗原 URGCP/URG4(Up-regulator of cell proliferation)C terminal 進口/國產(chǎn) 規(guī)格: 0.5mg
脫羧酶蛋白體36抗體 Anti-CXorf36 0.2ml
beta 亞基絨毛膜促性腺抗原 Beta-HCG (Human chorionic gonadotropin Beta) 現(xiàn)貨供應(yīng) 規(guī)格: 0.5mg
周期素A抗體 Anti-Cyclin A 0.1ml
α亞基絨毛膜促性腺多肽抗原 Alpha-HCG(Human chorionic gonadotropin Alpha ) 特價促銷 規(guī)格: 0.5mg
周期素B1抗體 Anti-Cyclin B1 0.1ml
膀胱腫瘤抗原 HCFHrp/BTA(Bladdertumor antigen)human 進口/國產(chǎn) 規(guī)格: 0.5mg
周期素C抗體 Anti-Cyclin C 0.1ml
高密度脂蛋白受體/清道夫受體抗原 CD36L1/SRB1 peptide 現(xiàn)貨供應(yīng) 規(guī)格: 0.5mg
周期素D1抗體 Anti-Cyclin D1 0.1ml
c-erbB-2受體抗體(N端) HER2 receptor(NT)(erbB-2 isoform 2 receptor N-Terminus) 特價促銷 規(guī)格: 0.5mg
周期素D2抗體 Anti-Cyclin D2 0.1ml