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操作流程:
(1)待測樣品孔中每孔加入待測樣品100μl,每種樣品設(shè)3個平行孔;設(shè)兩個陰性對照孔,每孔加未處理組的細(xì)胞裂解液100μl;另設(shè)一個空白對照孔,加入純細(xì)胞裂解液100μl。
(2)酶標(biāo)板置4℃,包被過夜。
(3)洗板:吸干孔內(nèi)反應(yīng)液,用洗滌液過洗一遍(將洗滌液注滿板孔后,即甩去),之后將洗滌液注滿板孔,浸泡1-2分鐘,間歇搖動。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干。重復(fù)洗滌3-4次。
(4)陰性對照孔每孔加入PBS 50μl,樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。
(5)酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),孵育60min。
(6)洗板,同(4)。
(7)每孔加1:5000稀釋的HRP-標(biāo)記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。
(8)酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),孵育60min。
(9)洗板,同(4)。
(10)每孔加TMB顯色液 100μl,輕輕混勻10s,置37℃暗處反應(yīng)15-20min。
(11)每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應(yīng)。
(12)分別測450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2,終測得的OD值為兩者之差(W1-W2),以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。
(13)數(shù)據(jù)處理:在得出標(biāo)本(S)和陰性對照(N)的 OD值后,計算S/N值。S/N≥2.1為陽性判定標(biāo)準(zhǔn)。
我司主營產(chǎn)品之一,產(chǎn)品皆嚴(yán)格按照相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)進行生產(chǎn),并經(jīng)過了嚴(yán)格地反復(fù)地檢測,我們以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)膽B(tài)度保證產(chǎn)品的質(zhì)量,從而保證您的實驗順利進行。產(chǎn)品供貨周期短,供貨及時,且我司還提供完整的售前和售后服務(wù)。本公司產(chǎn)品僅用于科研。
產(chǎn)品名稱 |
小鼠基質(zhì)金屬蛋白酶15(MMP15)ELISA試劑盒 |
英文名稱 |
Mouse Matrix Metalloproteinase 15(MMP15)ELISA Kit |
貨號 |
PM105306 |
試劑配制:
1、酶聯(lián)板assay plate :一塊96孔或者48孔。
2、標(biāo)準(zhǔn)品standard:2瓶凍干品。
3、樣品稀釋液sample diluent:1×20ml/瓶。
4、生物素標(biāo)記抗體稀釋液biotin-antibody diluent:1×10ml/瓶。
5、辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素稀釋液 hrp-avidin diluent:1×10ml/瓶。
6、生物素標(biāo)記抗體biotin-antibody:1×120μl/瓶1:100
7、辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素hrp-avidin:1×120μl/瓶1:100
8、底物溶液tmb e:1×10ml/瓶。
9、濃洗滌液wash buffer:1×20ml/瓶,使用時每瓶用蒸餾水稀釋25倍。
10、終止液stop solution:1×10ml/瓶2n h2so4。
試劑準(zhǔn)備:
1. 使用前將所有的試劑和標(biāo)本緩慢均衡至室溫(18-25oC),試劑不能直接在37oC溶解。
2. 標(biāo)準(zhǔn)品(凍干品):每瓶標(biāo)準(zhǔn)品加入標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液1mL,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復(fù)顛倒/搓動以助溶解,其濃度為2000pg/mL。準(zhǔn)備7個稀釋標(biāo)準(zhǔn)品的EP管,每個EP管中加入150μL的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液,如圖所示依次倍比稀釋成不同的梯度, 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液(0pg/mL)直接作為空白孔。為保證實驗結(jié)果有效性,每次實驗請使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。
3. 濃洗滌液:用580mL蒸餾水或去離子水將20mL濃洗滌液稀釋至600mL,進行30倍稀釋。
樣本實驗前準(zhǔn)備:
ELISA試劑盒液體樣本:包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清等。
(1)血清
室溫血液自然凝固10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
(2)血漿:
應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
(3)尿液:
用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實行。
(4)細(xì)胞培養(yǎng)上清:
檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。
(5)培養(yǎng)細(xì)胞
檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,細(xì)胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑,以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
(6)組織標(biāo)本
切割標(biāo)本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿化。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。
注意事項:
1. 試劑盒應(yīng)在有效期內(nèi)使用,請不要使用過期的試劑。
2. 試劑盒未使用時應(yīng)保存在 2-8℃冰箱,已復(fù)溶但未用完的標(biāo)準(zhǔn)品,請丟棄。
3. 試劑盒使用前請在室溫恢復(fù) 30 min,且充分混勻試劑盒里的各種成份及制備的樣品。
4. 在試驗中標(biāo)準(zhǔn)品和樣本建議作復(fù)孔檢測,且加入試劑的順序應(yīng)保持一致。
5. 為避免交叉污染,請在試驗中使用 1 次性試管,槍頭,封板膜及潔凈塑料容器。
6. 濃縮生物素化抗體和濃縮酶結(jié)合物的體積較少,在運輸過程中微量液體會沾到管壁及瓶蓋上,使用前請離心處理(5-10 S 即可),使管壁上的液體集中在管底部,取用時,請用移液器小心吹打幾次。
7. 除了試劑盒中的濃縮洗滌液和終止液可以通用外,請不要使用其他來源試劑盒內(nèi)含的試劑代替本試劑盒中的某單個組分。
8. 為保證結(jié)果準(zhǔn)確,每次檢測均需做標(biāo)準(zhǔn)曲線。
三苯雙脒 英文名稱 UV法含量測定 規(guī)格: 20mg/支進口/國產(chǎn)
紫草素 英文名稱 Shikonin 規(guī)格: 20mg/支進口/國產(chǎn) 含量: ≥95%
吲哚布芬 英文名稱 含量測定 規(guī)格: 20mg/支進口/國產(chǎn)
肉蓯蓉(管花肉蓯蓉) 英文名稱 中藥對照藥材 規(guī)格: 20mg/支進口/國產(chǎn) 含量: TLC法鑒別
狼毒(狼毒大戟) 英文名稱 中藥對照藥材 規(guī)格: 20mg/支進口/國產(chǎn) 含量: TLC法鑒別
九里香(九里香) 英文名稱 TLC法鑒別 規(guī)格: 20mg/支進口/國產(chǎn)
蓮心堿高氯酸鹽 英文名稱 規(guī)格: 20mg/支進口/國產(chǎn) 含量: Liensinine Perchlorate
248 代森錳 標(biāo)準(zhǔn)品 CAS號:0.25g 英文名稱 規(guī)格: 20mg/支進口/國產(chǎn) 含量:
漢黃芩苷 英文名稱 Wogonoside 規(guī)格: 20mg/支進口/國產(chǎn) 含量: 98%
硫必利雜質(zhì)A(2-甲氧基-5-甲磺?;剑?英文名稱 檢查 規(guī)格: 20mg/支進口/國產(chǎn)
牡荊素鼠李糖苷 英文名稱 對照品 規(guī)格: 20mg/支進口/國產(chǎn) 含量: 含量測定Biotin-X-NHS (250 mg)6-[[5-[(3aS,4S,6aR)-hexhydro-2-oxo-1H-thieno[3,4-d]imidazol-4-yl]-1-oxopentyl]amino]-2,5-dioxo-1-pyrrolidinyl ester-hexanoic acid; Biotin-X-NHS
Pinane Thromboxane A2 (5 mg)9。alpha。,11。alpha。-(dimethyl)methylene-15S-hydroxy-11a-deoxy-11a-methylene-thromba-5Z,13E-dien-1-oic; PTA2|Pinane TXA2; Pinane Thromboxane A2
Indole-3-Acetic Acid (sodium salt) (5 g)Heteroauxin|IAA; 1H-indole-3-acetic acid, monosodium salt
Griess Reagent R2 (8 ml)Griess Reagent R2
3,GW 4869 dihydrocloride
CAY10408 (1 mg)9-oxo-11。alpha。,16R-dihydroxy-17-cyclobutyl-5Z,13E-dien-1-oic acid; CAY10408
O-11 (1 mg)10-propoxy-decanoic acid; 11-Oxatetradecanoic Acid; O-11
7-Methoxy-1-methyl-9H-pyrido[3,4-b]indoleHarmine
5(Z),8(Z),11(Z)-Eicosatrienoic Acid (1 mg)5Z,8Z,11Z-eicosatrienoic acid; Mead Acid; 5(Z),8(Z),11(Z)-Eicosatrienoic Acid
SPE Cartridges (Mixed Bed) (10 ea)Bond Elut Certify II; SPE Cartridges (Mixed Bed)
BRDT bromodomain 1 Ligand/APC Acceptor Mixture (420 wells)BRDT bromodomain 1 Ligand/APC Acceptor Mixture
PB-22 8-hydroxyisoquinoline isomer (5 mg)isoquinolin-8-yl 1-pentyl-1H-indole-3-carboxylate; PB-22 8-hydroxyisoquinoline isomer
小鼠基質(zhì)金屬蛋白酶15(MMP15)ELISA試劑盒原代骨細(xì)胞特制基礎(chǔ)無血清培養(yǎng)基 規(guī)格: 500/100ml
嗜酸粒細(xì)胞趨化蛋白Eotaxin 1(Eotaxin 1/CCL11)ELISA試劑盒英文名稱:Human Eotaxin 1 ELISA Kit 規(guī)格:96T/48T小鼠β葡萄糖醛酸苷酶(βGD)ELISA Kit,48T/96T 進口/分裝
原代滑膜皮細(xì)胞特制基礎(chǔ)無血清培養(yǎng)基 規(guī)格: 500/100ml
癌胚鐵蛋白(CEF) ELISA試劑盒英文名稱:Human Carciembryonic Ferritin,CEF ELISA Kit規(guī)格:96T/48T大鼠血小板因子3(PF-3)ELISA Kit,48T/96T 進口/國產(chǎn)
原代骨骼肌細(xì)胞特制基礎(chǔ)無血清培養(yǎng)基 規(guī)格: 500/100ml
粘蛋白/粘液素7(MUC7)ELISA試劑盒英文名稱:Human Mucin-7,MUC7 ELISA Kit規(guī)格:96T/48T抗心磷脂抗體IgG(ACA-IgG)ELISA Kit,48T/96T 進口/分裝
原代神經(jīng)元細(xì)胞特制基礎(chǔ)無血清培養(yǎng)基 規(guī)格: 500/100ml
抗核膜糖蛋白210抗體(gp210)ELISA試劑盒 英文名稱:Human Anti-glucoprotein 210,GP210 ELISA Kit規(guī)格:96T/48T整合素αⅤβ3(Integrin αⅤβ3)ELISA Kit,48T/96T 進口/國產(chǎn)
原代神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞特制基礎(chǔ)無血清培養(yǎng)基 規(guī)格: 500/100ml
抗血小板抗體IgG/M/A(PA-IgG/M/A)ELISA試劑盒英文名稱:Human platelet antibodies IgG/M/A,PA-IgG/M/A ELISA Kit規(guī)格:96T/48T猴載脂蛋白B100(apo-B100)ELISA Kit,48T/96T 進口/分裝
原代單核細(xì)胞特制基礎(chǔ)無血清培養(yǎng)基 規(guī)格: 500/100ml
抗副流感病毒IgG抗體(anti-PIV IgG )ELISA試劑盒 英文名稱:Human Poliomyelitis Virus,PV-IgG ELISA Kit規(guī)格:96T/48T大鼠抗單核細(xì)胞抗體(AMA)ELISA Kit,48T/96T 進口/國產(chǎn)