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操作流程:
(1)待測樣品孔中每孔加入待測樣品100μl,每種樣品設(shè)3個平行孔;設(shè)兩個陰性對照孔,每孔加未處理組的細胞裂解液100μl;另設(shè)一個空白對照孔,加入純細胞裂解液100μl。
(2)酶標(biāo)板置4℃,包被過夜。
(3)洗板:吸干孔內(nèi)反應(yīng)液,用洗滌液過洗一遍(將洗滌液注滿板孔后,即甩去),之后將洗滌液注滿板孔,浸泡1-2分鐘,間歇搖動。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干。重復(fù)洗滌3-4次。
(4)陰性對照孔每孔加入PBS 50μl,樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。
(5)酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),孵育60min。
(6)洗板,同(4)。
(7)每孔加1:5000稀釋的HRP-標(biāo)記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。
(8)酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),孵育60min。
(9)洗板,同(4)。
(10)每孔加TMB顯色液 100μl,輕輕混勻10s,置37℃暗處反應(yīng)15-20min。
(11)每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應(yīng)。
(12)分別測450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2,終測得的OD值為兩者之差(W1-W2),以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。
(13)數(shù)據(jù)處理:在得出標(biāo)本(S)和陰性對照(N)的 OD值后,計算S/N值。S/N≥2.1為陽性判定標(biāo)準(zhǔn)。
我司主營產(chǎn)品之一,產(chǎn)品皆嚴(yán)格按照相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)進行生產(chǎn),并經(jīng)過了嚴(yán)格地反復(fù)地檢測,我們以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)膽B(tài)度保證產(chǎn)品的質(zhì)量,從而保證您的實驗順利進行。產(chǎn)品供貨周期短,供貨及時,且我司還提供完整的售前和售后服務(wù)。本公司產(chǎn)品僅用于科研。
產(chǎn)品名稱 |
小鼠干細胞因子(SCF)免費代測ELISA Kit |
英文名稱 |
Mouse Stem Cell Factor(SCF)ELISA Kit |
貨號 |
PM105424 |
試劑配制:
1、酶聯(lián)板assay plate :一塊96孔或者48孔。
2、標(biāo)準(zhǔn)品standard:2瓶凍干品。
3、樣品稀釋液sample diluent:1×20ml/瓶。
4、生物素標(biāo)記抗體稀釋液biotin-antibody diluent:1×10ml/瓶。
5、辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素稀釋液 hrp-avidin diluent:1×10ml/瓶。
6、生物素標(biāo)記抗體biotin-antibody:1×120μl/瓶1:100
7、辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素hrp-avidin:1×120μl/瓶1:100
8、底物溶液tmb e:1×10ml/瓶。
9、濃洗滌液wash buffer:1×20ml/瓶,使用時每瓶用蒸餾水稀釋25倍。
10、終止液stop solution:1×10ml/瓶2n h2so4。
試劑準(zhǔn)備:
1. 使用前將所有的試劑和標(biāo)本緩慢均衡至室溫(18-25oC),試劑不能直接在37oC溶解。
2. 標(biāo)準(zhǔn)品(凍干品):每瓶標(biāo)準(zhǔn)品加入標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液1mL,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復(fù)顛倒/搓動以助溶解,其濃度為2000pg/mL。準(zhǔn)備7個稀釋標(biāo)準(zhǔn)品的EP管,每個EP管中加入150μL的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液,如圖所示依次倍比稀釋成不同的梯度, 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液(0pg/mL)直接作為空白孔。為保證實驗結(jié)果有效性,每次實驗請使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。
3. 濃洗滌液:用580mL蒸餾水或去離子水將20mL濃洗滌液稀釋至600mL,進行30倍稀釋。
樣本實驗前準(zhǔn)備:
ELISA試劑盒液體樣本:包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養(yǎng)上清等。
(1)血清
室溫血液自然凝固10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
(2)血漿:
應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
(3)尿液:
用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實行。
(4)細胞培養(yǎng)上清:
檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。
(5)培養(yǎng)細胞
檢測細胞內(nèi)的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑,以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
(6)組織標(biāo)本
切割標(biāo)本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿化。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。
注意事項:
1. 試劑盒應(yīng)在有效期內(nèi)使用,請不要使用過期的試劑。
2. 試劑盒未使用時應(yīng)保存在 2-8℃冰箱,已復(fù)溶但未用完的標(biāo)準(zhǔn)品,請丟棄。
3. 試劑盒使用前請在室溫恢復(fù) 30 min,且充分混勻試劑盒里的各種成份及制備的樣品。
4. 在試驗中標(biāo)準(zhǔn)品和樣本建議作復(fù)孔檢測,且加入試劑的順序應(yīng)保持一致。
5. 為避免交叉污染,請在試驗中使用 1 次性試管,槍頭,封板膜及潔凈塑料容器。
6. 濃縮生物素化抗體和濃縮酶結(jié)合物的體積較少,在運輸過程中微量液體會沾到管壁及瓶蓋上,使用前請離心處理(5-10 S 即可),使管壁上的液體集中在管底部,取用時,請用移液器小心吹打幾次。
7. 除了試劑盒中的濃縮洗滌液和終止液可以通用外,請不要使用其他來源試劑盒內(nèi)含的試劑代替本試劑盒中的某單個組分。
8. 為保證結(jié)果準(zhǔn)確,每次檢測均需做標(biāo)準(zhǔn)曲線。
CaES-17(食管細胞)球孢白僵 Beauveria bassiana
CIN-1培養(yǎng)基配套試劑 規(guī)格: 10支/盒 用途: 試劑A和試劑B各一支添加于100ml培養(yǎng)基中
無花果曲霉 Aspergillus ficuum葡萄汁酵母 Saccharomyces uvarum
小鼠腺腫瘤細胞英文名稱:C127
大鼠肝星形細胞蘇云金芽孢桿肯尼亞亞種 Bacillus thuringiensis subsp. Kenyae
KB(口腔表樣細胞)5×106cells/瓶×2
BETA-SSA瓊脂/BETA-SSA Agar鏈球的選擇性分離培養(yǎng)250克國產(chǎn)/進口
糖化酵母 Saccharomyces diastaticus串珠 Leuconostoc lactis
長尾綠猴胚胎細胞英文名稱:4179
鐮刀 Fusarium sp.真姬菇 Hypsizigus marmoreus
賴氨酸鐵瓊脂/LIA瓊脂/Lysine Iron Agar食品中沙門氏生試驗250克國產(chǎn)/進口3,4-Dihydro-2,2-dimethyl-2H-naphthoβ-Lapachone
JWH 018 N-pentanoic acid metabolite (5 mg)5-(3-(1-naphthoyl)-1H-indol-1-yl)-pentanoic acid; JWH 018 N-pentanoic acid metabolite
chloro[[2,EUK-134
Sodium Phosphate Stock Solution (500 mM, pH 6。0) (1 L)Sodium Phosphate Stock Solution (500 mM, pH 6。0)
MDL 28170 (5 mg)N-[(1S)-1-[[(1-formyl-2-phenylethyl)amino]carbonyl]-2-methylpropyl]-carbamic acid, phenylmethyl ester; Calpain Inhibitor III; MDL 28170
氯壓定Clonidine hydrochloride
TGX-221 (100 ug)TGX-221, 7-methyl-2-(4-morpholinyl)-9-[1-(phenylamino)ethyl]-4H-pyrido[1,2-a]pyrimidin-4-one
Unoprostone (10 mg)9。alpha。,11。alpha。-dihydroxy-13,14-dihydro-15-oxo-20a,20b-dihomoprost-5-en-1-oic acid; 13,14-dihydro-15-keto-20-ethyl Prostaglandin F2α|13,14-dihydro-15-keto-20-ethyl PGF2α; Unoprostone
UR- N-(5-bromopentyl) analog (10 mg)(1-(5-bromopentyl)-1H-indol-3-yl)(2,2,3,3-tetramethylcyclopropyl)methanone; 5-bromo UR-; UR- N-(5-bromopentyl) analog
Palipeidone (25 mg)9-hydroxy Rispeidone; 3-[2-[4-(6-fluoro-1,2-benzisoxazol-3-yl)-1-pipeidinyl]ethyl]-6,7,8,9-tetrahydro-9-hydroxy-2-methyl-4H-pyrido[1,2-a]pyrimidin-4-one
15-OxoETE (100 ug)15-oxo-5Z,8Z,11Z,13E-eicosatetraenoic acid; 15-KETE; 15-OxoETE
PtdIns-(3,4,5)-P3 (1,2-dipalmitoyl) (sodium salt) (5 mg)1-(1,2R-dihexadecanoylphosphatidyl)inositol-3,4,5-trisphosphate, tetrasodium salt; Phosphatidylinositol-3,4,5-triphosphate C-16|DPPI-3,4,5-P3; PtdIns-(3,4,5)-P3 (1,2-dipalmitoyl) (sodium salt)
小鼠干細胞因子(SCF)免費代測ELISA KitxPC-3, 原位胰腺腺細胞株普通變形桿 Proteus vulgaris
補體片斷4b(C4b)ELISA試劑盒英文名稱:Human Complement fragment 4b,C4b ELISA Kit規(guī)格:96T/48T小鼠甲狀旁腺(PTH)ELISA Kit,48T/96T 特價促銷
地衣芽孢桿 Bacillus licheniformis膠韌革 Gloeostereum incarnatum
Salusin-α ELISA試劑盒英文名稱:Human Salusin α ELISA Kit規(guī)格:96T/48T雞抗凝血酶Ⅲ抗體(AT-Ⅲ)ELISA Kit,48T/96T 進口/原裝
三葉草根瘤 Rhizobium trifolii蘇木素染色液
尿素酶相關(guān)蛋白C(UreC)ELISA試劑盒英文名稱:Human urease related protein C,UreC ELISA Kit規(guī)格:96T/48T大鼠骨膠原交聯(lián)(Cr)ELISA Kit,48T/96T 特價促銷
SW 982(滑膜肉瘤細胞)大鼠外周血白細胞完全培養(yǎng)基
雷帕霉素靶蛋白(mTOR)ELISA試劑盒 英文名稱:Human mammalian target of rapamyein,mTOR ELISA Kit規(guī)格:96T/48T大鼠可溶性血小板內(nèi)皮細胞粘附分子1(sPECAM-1)進口/原裝
植物桿 Lactobacillus plantarum屎腸球 Enterococcus faecium
小鼠抗單鏈DNA抗體/變性DNA抗體(ssDNA)ELISA試劑盒 英文名稱:Mouse single stranded DNA Antibody,ssDNA ELISA Kit規(guī)格:96T/48T植物維生素D2(VD2)ELISA Kit,48T/96T 特價促銷
粗柄羊肚 Morchella crassipas中慢生華癸根瘤 Mesorhizobium huakuii
小鼠骨成型蛋白受體Ⅱ(BMPR-Ⅱ)ELISA試劑盒英文名稱:Mouse Bone morphogenetic protein receptor Ⅱ,BMPR-Ⅱ ELISA Kit規(guī)格:96T/48T大鼠抗中性粒/中心體抗體(ACA)ELISA Kit,48T/96T