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細(xì)胞接收后的處理：
1）收到細(xì)胞后，75%酒精瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染，請(qǐng)拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。
2）請(qǐng)?jiān)?或5X顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài)，同時(shí)給剛收到的細(xì)胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為售后時(shí)收到時(shí)細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。
3）貼壁細(xì)胞：細(xì)胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h，顯微鏡下觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)和貼壁情況，有些貼壁細(xì)胞在快遞運(yùn)送過(guò)程中會(huì)因振動(dòng)脫落和脫落后成團(tuán)的情況。若鏡下觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)密度若在60%以下，可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基（若有未貼壁的細(xì)胞需要離心回收，重懸打入到原培養(yǎng)瓶中）,加入新配制的完全培養(yǎng)基6-8mL，放到細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細(xì)胞生長(zhǎng)密度達(dá)70%-80%以上，可以對(duì)細(xì)胞進(jìn)行傳代處理。傳代過(guò)程中，若因運(yùn)輸振動(dòng)脫落的細(xì)胞需要離心回收。
4）備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說(shuō)明書(shū)細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代。
英文名稱(chēng)
NCI-H1618
產(chǎn)品形態(tài)
懸浮生長(zhǎng)
貨號(hào)
P-X9035
產(chǎn)品分類(lèi)
人
規(guī)格
1×106
包裝
株
來(lái)源
肺
用途
僅供科研研究使用
產(chǎn)品詳情：
種屬來(lái)源；人
性別年齡；女性
組織來(lái)源；肺
生長(zhǎng)特性；懸浮生長(zhǎng)
細(xì)胞形態(tài)；
細(xì)胞規(guī)格；1 X 106cells/T25或1 mL凍存管
培養(yǎng)條件；DMEM/F12 + 0.005 mg/ml Insulin + 0.01 mg/ml Transferrin + 30nM Sodium selenite (final conc.) + 10 nM Hydrocortisone (final conc.) + 10 nM beta-estradiol (final conc.) + extra 2mM L-glutamine (for final conc. of 4.5 mM) + 5% fetal bovine serum37 ℃, 5% CO2
凍存條件；90% FBS + 10% DMSO
傳代方法；1:3傳代, 2-3天傳1代
干冰運(yùn)輸及復(fù)蘇好存活細(xì)胞
（1）1mL凍存管包裝干冰運(yùn)輸，收到后-80度冰箱保存過(guò)夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染，請(qǐng)立即與我們聯(lián)系。（2）T25瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨，收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作。
1）準(zhǔn)備DMEM培養(yǎng)基；胎牛血清，10%；雙抗，1%。
2）培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。
二．細(xì)胞處理：
1）凍存細(xì)胞的復(fù)蘇：：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8ml完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過(guò)夜
。天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況和細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。對(duì)于貼壁細(xì)胞傳代可以參考以下方法：1、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2、加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長(zhǎng)消化時(shí)間），然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來(lái)終止消化。
3、輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說(shuō)明書(shū)要求配置的新的完全培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長(zhǎng)活力，后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。
3）細(xì)胞凍存:收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時(shí)凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。下面T25瓶為例：
1、細(xì)胞凍存時(shí)按照細(xì)胞傳代的過(guò)程收集消化好的細(xì)胞到離心管中，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，來(lái)決定細(xì)胞的凍存密度。一般細(xì)胞的推薦凍存密度為1×10?~1×10?個(gè)活細(xì)胞/ml.
2、1000rpm離心3-5min，去掉上清。用配制好的細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞 ，按每1ml凍存液含1×10?~1×10?個(gè)活細(xì)胞/ml分配到一個(gè)凍存管中將細(xì)胞分配到凍存管中，標(biāo)注好名稱(chēng)、代數(shù)、日期等信息。
3、將要凍存的細(xì)胞置于程序降溫盒中，-80度冰箱中過(guò)夜，之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲(chǔ)存。同時(shí)記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。
實(shí)驗(yàn)原理：
公司正在出售的產(chǎn)品：
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乙酰化組蛋白H2B K5抗體 |
人蛋白水解誘導(dǎo)因子/皮離蛋白(PIF/DCD)elisa檢測(cè)試劑盒 |
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Histone H2B (acetyl K5) |
大鼠Rho鳥(niǎo)苷酸交換因子7(Arhgef7/Pak3bp/Pixb)elisa分析檢測(cè)試劑盒 |
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細(xì)胞凋亡增強(qiáng)核酸酶抗體 |
小鼠凋亡誘導(dǎo)因子(AIF)elisa檢測(cè)試劑盒 |
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AEN |
通用型HRP復(fù)合物穩(wěn)定/稀釋溶液 |
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癌/睪丸抗原113抗體 Anti-Tex14/CT113 |
即用型LB液體培養(yǎng)基Amp+ 60VIA |
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轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子RFX4抗體 Anti-RFX4 |
線粒體核糖體蛋白S26抗體 MRPS26 |
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EGR1結(jié)合蛋白2抗體 Anti-NAB2/MADER |
小腦肽1抗體 CBLN1 |
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WD重復(fù)膜蛋白61抗體 Anti-WDR61 |
巴爾得-別德?tīng)柧C合征相關(guān)蛋白12抗體 BBS12 |
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磷酸化SH3結(jié)構(gòu)域結(jié)合蛋白2抗體 phospho-SH3BP2 (Ser427) |
斑聯(lián)蛋白抗體 Zyxin |
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周期素依賴(lài)性激酶5單克隆抗體 CDK5 |
CD299抗體 CD299 |
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轉(zhuǎn)錄源蛋白質(zhì)CUX2抗體 Cux2 |
CoREST2蛋白抗體 CoREST2 |
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谷氧還蛋白5抗體 Glutaredoxin 5 |
磷酸化3磷酸肌醇依賴(lài)性蛋白激酶1 Phospho-PDK1 (Ser241) |
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含patatin樣磷脂酶6抗體 PNPLA6/NTE |
NDUFS2抗體 NDUFS2 |
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MOGAT3蛋白抗體 MOGAT3 |
NCI-H1618 人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞溶質(zhì)載體家族25成員43抗體 SLC25A43 |
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神經(jīng)細(xì)胞NB3特定蛋白抗體 Contactin 6 |
小鼠EGF樣域蛋白7(EGFL7)elisa檢測(cè)試劑盒 |
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Ral鳥(niǎo)苷酸酶活性分析試劑盒 |
大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子D(VEGF-D)elisa檢測(cè)試劑盒 |
實(shí)驗(yàn)步驟：
1 將目的基因構(gòu)建到合適的慢病毒載體上，利用293T細(xì)胞進(jìn)行慢病毒包裝，獲得含目的基因的慢病毒；
2 轉(zhuǎn)染前24 h進(jìn)行細(xì)胞鋪板，轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞密度控制在80%左右；
3 天加入適量病毒懸液感染細(xì)胞，并置于37 ℃，5% CO2培養(yǎng)箱中孵育；
4 24 h后用新鮮培養(yǎng)基替換含有病毒的培養(yǎng)基，并繼續(xù)培養(yǎng)；
5 在轉(zhuǎn)染3-4天后開(kāi)始加藥篩選培養(yǎng)，直至顯微鏡下觀察熒光細(xì)胞比例為100%，獲得穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系。