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SK-OV-3-eGFP-LUC人卵巢癌細(xì)胞-綠色熒光蛋白-熒光素酶標(biāo)記
英文名稱
SK-OV-3-LUC-EGFP
產(chǎn)品形態(tài)
上皮細(xì)胞樣 貼壁生長(zhǎng)
貨號(hào)
P-X11337
產(chǎn)品分類
人
規(guī)格
1×106
包裝
株
來源
卵巢
用途
僅供科研研究使用
產(chǎn)品詳情：
細(xì)胞別稱；SK-OV-3-LUC-EGFP；人卵巢癌細(xì)胞-熒光素酶標(biāo)記-綠色熒光蛋白；人卵巢癌細(xì)胞-LUC-EGFP
種屬來源；人
組織來源；卵巢
生長(zhǎng)特性；貼壁生長(zhǎng)
細(xì)胞形態(tài)；上皮細(xì)胞樣
細(xì)胞代數(shù)；p3-p8
背景簡(jiǎn)介；Luciferase SKOV3細(xì)胞穩(wěn)定表達(dá)螢火蟲熒光素酶。該細(xì)胞株性狀穩(wěn)定，培養(yǎng)時(shí)不需要添加維持。可用作螢火蟲熒光素酶活性檢測(cè)中的陽(yáng)性對(duì)照，也可用于活體動(dòng)物成像實(shí)驗(yàn)。SK-OV-3-LUC-EGFP細(xì)胞通過慢病毒轉(zhuǎn)染的方式攜帶Luc基因。SK-OV-3細(xì)胞是由G.Trempe和L.J.Old于1973年從卵巢腫瘤病人的腹水分離得到。SK-OV-3細(xì)胞對(duì)腫瘤壞死因子和幾種細(xì)胞毒性包括白喉、順鉑和阿霉素均耐受。SK-OV-3細(xì)胞在裸鼠中致瘤，且形成與卵巢原位癌一致的中度分化的腺癌。
生物等級(jí)；1
細(xì)胞規(guī)格；1x106cells/T25培養(yǎng)瓶或者1mL凍存管包裝
支原體檢測(cè)；無(wú)
保藏機(jī)構(gòu)；ATCC; HTB-77 ECACC; 91091004
培養(yǎng)基；90% McCoy’s 5A+10% FBS+雙抗+1. 0ug/ml puro
培養(yǎng)條件；氣相：95%空氣+5%二氧化碳；溫度：37℃
凍存條件；無(wú)血清凍存液，液氮儲(chǔ)存
干冰運(yùn)輸及復(fù)蘇好存活細(xì)胞
（1）1mL凍存管包裝干冰運(yùn)輸，收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染，請(qǐng)立即與我們聯(lián)系。（2）T25瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨，收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作。
1）收到細(xì)胞后，75%酒精瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染，請(qǐng)拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。
2）請(qǐng)?jiān)?或5X顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài)，同時(shí)給剛收到的細(xì)胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為售后時(shí)收到時(shí)細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。
3）貼壁細(xì)胞：細(xì)胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h，顯微鏡下觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)和貼壁情況，有些貼壁細(xì)胞在快遞運(yùn)送過程中會(huì)因振動(dòng)脫落和脫落后成團(tuán)的情況。若鏡下觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)密度若在60%以下，可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基（若有未貼壁的細(xì)胞需要離心回收，重懸打入到原培養(yǎng)瓶中）,加入新配制的完全培養(yǎng)基6-8mL，放到細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細(xì)胞生長(zhǎng)密度達(dá)70%-80%以上，可以對(duì)細(xì)胞進(jìn)行傳代處理。傳代過程中，若因運(yùn)輸振動(dòng)脫落的細(xì)胞需要離心回收。
4）備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代。
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備DMEM培養(yǎng)基；胎牛血清，10%；雙抗，1%。
2）培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。
二．細(xì)胞處理：
1）凍存細(xì)胞的復(fù)蘇：：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8ml完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過夜
。天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況和細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。對(duì)于貼壁細(xì)胞傳代可以參考以下方法：1、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2、加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長(zhǎng)消化時(shí)間），然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化。
3、輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的完全培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長(zhǎng)活力，后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。
3）細(xì)胞凍存:收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時(shí)凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。下面T25瓶為例：
1、細(xì)胞凍存時(shí)按照細(xì)胞傳代的過程收集消化好的細(xì)胞到離心管中，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，來決定細(xì)胞的凍存密度。一般細(xì)胞的推薦凍存密度為1×10?~1×10?個(gè)活細(xì)胞/ml.
2、1000rpm離心3-5min，去掉上清。用配制好的細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞 ，按每1ml凍存液含1×10?~1×10?個(gè)活細(xì)胞/ml分配到一個(gè)凍存管中將細(xì)胞分配到凍存管中，標(biāo)注好名稱、代數(shù)、日期等信息。
3、將要凍存的細(xì)胞置于程序降溫盒中，-80度冰箱中過夜，之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲(chǔ)存。同時(shí)記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。
實(shí)驗(yàn)原理：
實(shí)驗(yàn)步驟：
1 將目的基因構(gòu)建到合適的慢病毒載體上，利用293T細(xì)胞進(jìn)行慢病毒包裝，獲得含目的基因的慢病毒；
2 轉(zhuǎn)染前24 h進(jìn)行細(xì)胞鋪板，轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞密度控制在80%左右；
3 天加入適量病毒懸液感染細(xì)胞，并置于37 ℃，5% CO2培養(yǎng)箱中孵育；
4 24 h后用新鮮培養(yǎng)基替換含有病毒的培養(yǎng)基，并繼續(xù)培養(yǎng)；
5 在轉(zhuǎn)染3-4天后開始加藥篩選培養(yǎng)，直至顯微鏡下觀察熒光細(xì)胞比例為100%，獲得穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系。
公司正在出售的產(chǎn)品：
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猴25羥基維生素D3(25 HVD3)elisa生化檢測(cè)試劑盒 |
山羊白介素12(IL-12/P40)elisa檢測(cè)試劑盒 |
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25 HVD3 ELISA kit |
大鼠多巴胺D1受體(D1R)elisa分析檢測(cè)試劑盒 |
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人多巴胺D1受體(D1R)elisa生化檢測(cè)試劑盒 |
小鼠可溶性核因子κB受體活化因子配基（sRANKL）elisa檢測(cè)試劑盒 |
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HumanD1RELISAKit |
細(xì)胞血紅素氧合酶-1（HEME OXYGENASE-1）活性比色法定量檢測(cè)試劑盒 |
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位素法DNA南方雜交印跡試劑盒 |
人N -甲基- D -天冬氨酸抗體IgG(NMDA Antibody IgG)elisa分析檢測(cè)試劑盒 |
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小鼠過氧化物酶體增殖物激活受體α(PPAR-α)elisa檢測(cè)試劑盒 |
羧酸酯酶3抗體 CES3 |
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快速DNA產(chǎn)物純化試劑盒 50次 |
調(diào)節(jié)中心體分離早期相關(guān)激酶BORA抗體 BORA |
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染色試劑盒 |
P物質(zhì)抗體 Substance P |
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脊髓小腦共濟(jì)失調(diào)蛋白BEAN1抗體 BEAN1 |
Ras相關(guān)蛋白RAB-12抗體 RAB12 |
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血小板反應(yīng)蛋白抗體 THBS1 |
21號(hào)染色體開放閱讀框7抗體 MAP3K7CL |
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液泡蛋白分選蛋白41抗體 VPS41 |
5號(hào)染色體開放閱讀框36抗體 C5orf36 |
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低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白11抗體 LRP11 |
肌微管素相關(guān)蛋白7抗體 MTMR7 |
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短鏈脫氫還原酶12抗體 DHRS12 |
FLJ45825蛋白抗體 FLJ45825 |
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FITC標(biāo)記人CD2單克隆抗體 human CD2/FITC |
SK-OV-3-eGFP-LUC人卵巢癌細(xì)胞-綠色熒光蛋白-熒光素酶標(biāo)記硫辛酰胺脫氫酶抗體 DLD |
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膜相關(guān)鳥苷酸反轉(zhuǎn)激酶1抗體 MAGI1 |
小鼠催產(chǎn)素(OT)elisa檢測(cè)試劑盒 |
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大鼠CD19分子(CD19)elisa檢測(cè)試劑盒 |
過氧化物酶（POD）測(cè)試盒 |