人臍帶間充質(zhì)干細胞-LUC;MSC-LUC-PURO

英文名稱	MSC-EGFP-LUC	產(chǎn)品形態(tài)	梭形細胞樣 貼壁生長
貨號	P-X11314	產(chǎn)品分類	人
規(guī)格	1×106	包裝	株
來源	臍帶	用途	僅供科研研究使用

細胞特性：

細胞別稱；MSC-EGFP-LUC；人臍帶間充質(zhì)干細胞-綠色熒光蛋白-熒光素酶標記；人臍帶間充質(zhì)干細胞-EGFP-LUC

種屬來源；人

組織來源；臍帶

生長特性；貼壁生長

形態(tài)特征；梭形細胞樣

puro藥篩濃度；MSC細胞puro藥篩濃度為1.0ug/ml，培養(yǎng)過程中建議使用0.5ug/ml濃度puro維持

質(zhì)量檢測；人臍帶間充質(zhì)干細胞純度高于 90%，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、、酵母和等

產(chǎn)品規(guī)格；1x106cells/T25細胞培養(yǎng)瓶

培養(yǎng)基；MSC-EGFP-LUC人臍帶間充質(zhì)干細胞-綠色熒光蛋白-熒光素酶標記專用培養(yǎng)基（IML-099-1）

培養(yǎng)條件；氣相：95%空氣+5%二氧化碳；溫度：37℃

背景簡介；臍帶間充質(zhì)干細胞是一種能分化成骨細胞、脂肪細胞和軟骨細胞的多能干細胞。其具有強大的殖能力，且參與構(gòu)成造血微環(huán)境，因此被廣泛應(yīng)用于組織工程，細胞和基因。Luciferase MSC細胞穩(wěn)定表達螢火蟲熒光素酶和綠色熒光蛋白。該細胞株性狀穩(wěn)定，培養(yǎng)時不需要添加維持。可用作螢火蟲熒光素酶活性檢測中的陽性對照，也可用于活體動物成像實驗。MSC細胞通過慢病毒轉(zhuǎn)染的方式攜帶Luc基因。

傳代方法；1:3至1:5，每周2- 3次

干冰運輸及復(fù)蘇好存活細胞

細胞接收后的處理：
1）收到細胞后，75%酒精瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細胞有污染，請拍照后及時聯(lián)系我們。
2）請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態(tài)，同時給剛收到的細胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為售后時收到時細胞狀態(tài)的依據(jù)
3）貼壁細胞：細胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h，顯微鏡下觀察細胞的生長和貼壁情況，有些貼壁細胞在快遞運送過程中會因振動脫落和脫落后成團的情況。若鏡下觀察細胞的生長密度若在60%以下，可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基（若有未貼壁的細胞需要離心回收，重懸打入到原培養(yǎng)瓶中）,加入新配制的完全培養(yǎng)基6-8mL，放到細胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細胞生長密度達70%-80%以上，可以對細胞進行傳代處理。傳代過程中，若因運輸振動脫落的細胞需要離心回收。
4）備注：運輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。  收到細胞后次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代 。                      
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1） 準備MEM（推薦iCell-0012）培養(yǎng)基；胎牛血清，10%；雙抗，1%。
2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。

二、細胞培養(yǎng)操作:

1) 復(fù)蘇細胞：將含有 1 mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 4 mL 培養(yǎng)基混 合均勻。在 1000 rpm 條件下離心 3 min，棄去上清液，加 1-2 mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有 細胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜 (或?qū)⒓毎麘乙杭尤?6 cm 皿中，加入約 4 mL 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜) 。天換液并檢查細胞密度。
2) 細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。 a、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。
b、加 1 mL 消化液 (0.25%Trypsin-0.53mM EDTA) 于培養(yǎng)瓶中，使消化液浸潤所有細胞，棄去 消化液，將培養(yǎng)瓶置于 37℃培養(yǎng)箱中消化 1 -3min (視細胞消化情況而定) ，然后在顯微鏡下 觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加2-3ml完全培養(yǎng)基終止消化。輕輕打勻后裝入無菌離心管中，1000 rpm離心5 min，棄去上清液，補加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。        。
c、將細胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
3) 細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為例；
a、收集細胞，裝入無菌離心管中，1000 rpm 條件下離心 4 min，棄去上清液， 用 PBS 清洗一遍，棄盡 PBS，進行細胞計數(shù)。
b、根據(jù)細胞數(shù)量加入無血清細胞凍存液，使細胞密度 5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍 存管凍存 1mL 細胞懸液，注意凍存管做好標識。
c、將凍存管放入-80℃冰箱，24 h 后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
三、培養(yǎng)注意事項:

1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象 發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。 
2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關(guān)信息，如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需 細胞因子等，確保細胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細胞出現(xiàn)問題，責任由 客戶自行承擔。 
3. 用 75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題，部分細胞由于溫度 變化及劇烈碰撞死亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象。觀察好細胞狀態(tài)后，75%酒精瓶壁將 T25 瓶置于 37℃培養(yǎng)箱放置 2-4h。 
4. 貼壁細胞可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞，900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，棄上 清。加 5 mL PBS 重懸細胞，再 900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，，用新鮮的完全培養(yǎng)基重懸 細胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。 
5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細胞培養(yǎng)。 
6. 建議客戶收到細胞后前 3 天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通 交流。由于運輸?shù)脑?，個別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，告知細胞 的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。 
7. 該細胞僅供科研使用。 
8. 備注：運輸用的培養(yǎng)基 (灌液培養(yǎng)基) 不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培 養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。收到細胞后次傳代建議 1：2 傳代 。 
9. 注意：  1:2 傳代就是 1 個 T25 瓶傳 2 個 T25 瓶或者 2 個 6cm 皿。不是 1 個 T25 瓶傳 2 個10cm 皿。

公司正在出售的產(chǎn)品：

倉鼠N端前腦鈉素(NT-proBNP)elisa生化檢測試劑盒	乙酰膽堿轉(zhuǎn)移酶ChAT測試盒測組織 40管/20樣 紫外比色法
NT-proBNP ELISA kit	血液總氨基酸含量熒光定量檢測試劑盒
人第10號染色體缺失并與張力蛋白同源的磷酸酶(PTEN/MMAC1)elisa生化檢測試劑盒	新德里超級金屬β-內(nèi)酰胺酶-1(NDM-1)elisa分析檢測試劑盒
HumanPTENELISAKit	細胞脂質(zhì)比色法定量檢測試劑盒
小鼠煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)elisa檢測試劑盒	大鼠磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PCK)elisa檢測試劑盒
大鼠胱天蛋白酶3(CASP3)elisa檢測試劑盒	絲裂原活化蛋白激酶6抗體 MAPK6
細胞丙酮酸激酶（PK）總活性比色法定量檢測試劑盒	肽基脯氨酞順反異構(gòu)酶Pinl單克隆抗體 PIN1
人甘露糖受體(MR)elisa分析檢測試劑盒	PE標記小鼠CD274單克隆抗體 mouse CD274/PE
雞傳染性法氏囊病病毒VP2蛋白抗體 IBDV-VP2	Rabbit Anti-Acetyl-Histone H3 (Lys36) antibody
嗅覺受體C2抗體 ORC2	1號染色體開放閱讀框173抗體 C1orf173
血小板源性生長因子D/脊髓源性生長因子B抗體 PDGF-D/SCDGFB	28S核糖體蛋白S33抗體 MRPS33
蛋白酪氨酸磷酸酶受體F多肽α3抗體 LIPA3	肌動蛋白結(jié)合蛋白2B抗體 CORO2B
癲癇相關(guān)蛋白6樣蛋白2抗體 SEZ6L2	FITC標記人CD62L單克隆抗體 human CD62L/FITC
F-box蛋白21抗體 FBXO21	人臍帶間充質(zhì)干細胞-LUC;MSC-LUC-PURO磷酸化組蛋白去乙?；?span>4/5/7抗體 Phospho-HDAC4 (Ser246) + HDAC5 (Ser259) + HDAC7 (Ser155)
鈉離子肌醇轉(zhuǎn)運蛋白抗體 SLC5A3	人雌三醇(E3)elisa檢測試劑盒
動物組織氫/鉀ATP酶（H＋/K＋－ATPase）活性比色法	大鼠低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白5(LRP5)elisa檢測試劑盒