運輸和保存：

干冰運輸及復(fù)蘇好存活細胞

（2）T25瓶復(fù)蘇的存活細胞常溫發(fā)貨，收到后按照細胞接收后的處理方法操作。

人食管癌細胞;EC9706

英文名稱	EC9706	產(chǎn)品形態(tài)	上皮細胞樣 貼壁生長
貨號	P-X11217	產(chǎn)品分類	人
規(guī)格	1×106	包裝	株
來源	食管癌	用途	僅供科研研究使用

細胞特性：

細胞別稱；EC9706 ；人食管癌細胞

種屬來源；人

組織來源；食管癌

生長特性；貼壁生長

細胞形態(tài)；上皮細胞樣

細胞代數(shù)；10代以內(nèi)

細胞規(guī)格；1x106cells/T25或1mL凍存管

支原體檢測；無

培養(yǎng)基；DMEM+10%FBS+1%雙抗

培養(yǎng)條件；氣相：95%空氣+5%二氧化碳；溫度：37℃

凍存條件；無血清凍存液，液氮儲存

細胞接收后的處理：
1）收到細胞后，75%酒精瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細胞有污染，請拍照后及時聯(lián)系我們。
2）請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態(tài)，同時給剛收到的細胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為售后時收到時細胞狀態(tài)的依據(jù)
3）貼壁細胞：細胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h，顯微鏡下觀察細胞的生長和貼壁情況，有些貼壁細胞在快遞運送過程中會因振動脫落和脫落后成團的情況。若鏡下觀察細胞的生長密度若在60%以下，可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基（若有未貼壁的細胞需要離心回收，重懸打入到原培養(yǎng)瓶中）,加入新配制的完全培養(yǎng)基6-8mL，放到細胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細胞生長密度達70%-80%以上，可以對細胞進行傳代處理。傳代過程中，若因運輸振動脫落的細胞需要離心回收。
4）備注：運輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。  收到細胞后次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代 。                      
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1） 準備MEM（推薦iCell-0012）培養(yǎng)基；胎牛血清，10%；雙抗，1%。
2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。

二、細胞培養(yǎng)操作:

1) 復(fù)蘇細胞：將含有 1 mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 4 mL 培養(yǎng)基混 合均勻。在 1000 rpm 條件下離心 3 min，棄去上清液，加 1-2 mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有 細胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜 (或?qū)⒓毎麘乙杭尤?6 cm 皿中，加入約 4 mL 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜) 。天換液并檢查細胞密度。
2) 細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。 a、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。
b、加 1 mL 消化液 (0.25%Trypsin-0.53mM EDTA) 于培養(yǎng)瓶中，使消化液浸潤所有細胞，棄去 消化液，將培養(yǎng)瓶置于 37℃培養(yǎng)箱中消化 1 -3min (視細胞消化情況而定) ，然后在顯微鏡下 觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加2-3ml完全培養(yǎng)基終止消化。輕輕打勻后裝入無菌離心管中，1000 rpm離心5 min，棄去上清液，補加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。        。
c、將細胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
3) 細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為例；
a、收集細胞，裝入無菌離心管中，1000 rpm 條件下離心 4 min，棄去上清液， 用 PBS 清洗一遍，棄盡 PBS，進行細胞計數(shù)。
b、根據(jù)細胞數(shù)量加入無血清細胞凍存液，使細胞密度 5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍 存管凍存 1mL 細胞懸液，注意凍存管做好標識。
c、將凍存管放入-80℃冰箱，24 h 后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

公司正在出售的產(chǎn)品：

植物1,5-二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶(RuBisCO)elisa生化檢測試劑盒	大鼠腫瘤壞死因子配體超家族成員12(TNFSF12)elisa檢測試劑盒
5-bisphosphate carboxylase/oxygenase(RuBisCO)ELISA Kit	Duck plague virus
人次黃嘌呤氧化酶elisa生化檢測試劑盒	鴨瘟病毒DPV抗體
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細胞過氧化氫（HYDROGEN PEROXIDE）活性	熱休克蛋白70蛋白4抗體
神經(jīng)突出相關(guān)蛋白Slitrk1抗體  Anti-Slitrk1	HSPA4
PE標記的兔抗人IgG H&L F(ab')2	酪氨酸酶相關(guān)蛋白1抗體  Anti-TRP1/gp75
Rabbit Anti-Human IgG F(ab')? / PE	蛋白酶體PSMα3抗體  Anti-Proteasome 20S alpha 3
磷酸化染色質(zhì)相關(guān)蛋白1-γ抗體	核糖體p70 S6蛋白激酶抗體  Anti-p70 S6 kinase alpha
Phospho-HP1 gamma (Ser93)	胚胎發(fā)育相關(guān)蛋白Nodal抗體  Anti-Nodal
鋅指蛋白198抗體  Anti-ZMYM2/ZNF198	人食管癌細胞;EC9706環(huán)指蛋白170抗體  Anti-RNF170
RHOG抗體  Anti-RHOG	LTC4 ELISA Kit
猴子白三烯C4(LTC4)elisa分析檢測試劑盒	人肺炎支原體抗體(MP-Ab)elisa分析檢測試劑盒

三、培養(yǎng)注意事項:

1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象 發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。 
2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關(guān)信息，如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需 細胞因子等，確保細胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細胞出現(xiàn)問題，責任由 客戶自行承擔。 
3. 用 75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題，部分細胞由于溫度 變化及劇烈碰撞死亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象。觀察好細胞狀態(tài)后，75%酒精瓶壁將 T25 瓶置于 37℃培養(yǎng)箱放置 2-4h。 
4. 貼壁細胞可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞，900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，棄上 清。加 5 mL PBS 重懸細胞，再 900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，，用新鮮的完全培養(yǎng)基重懸 細胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。 
5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細胞培養(yǎng)。 
6. 建議客戶收到細胞后前 3 天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通 交流。由于運輸?shù)脑?，個別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，告知細胞 的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。 
7. 該細胞僅供科研使用。 
8. 備注：運輸用的培養(yǎng)基 (灌液培養(yǎng)基) 不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培 養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。收到細胞后次傳代建議 1：2 傳代 。 
9. 注意：  1:2 傳代就是 1 個 T25 瓶傳 2 個 T25 瓶或者 2 個 6cm 皿。不是 1 個 T25 瓶傳 2 個10cm 皿。