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細(xì)胞接收后的處理：
1）收到細(xì)胞后，75%酒精瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染，請(qǐng)拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。
2）請(qǐng)?jiān)?或5X顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài)，同時(shí)給剛收到的細(xì)胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為售后時(shí)收到時(shí)細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。
3）貼壁細(xì)胞：細(xì)胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h，顯微鏡下觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)和貼壁情況，有些貼壁細(xì)胞在快遞運(yùn)送過程中會(huì)因振動(dòng)脫落和脫落后成團(tuán)的情況。若鏡下觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)密度若在60%以下，可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基（若有未貼壁的細(xì)胞需要離心回收，重懸打入到原培養(yǎng)瓶中）,加入新配制的完全培養(yǎng)基6-8mL，放到細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細(xì)胞生長(zhǎng)密度達(dá)70%-80%以上，可以對(duì)細(xì)胞進(jìn)行傳代處理。傳代過程中，若因運(yùn)輸振動(dòng)脫落的細(xì)胞需要離心回收。
4）備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代。
英文名稱
Kupffer
產(chǎn)品形態(tài)
貼壁生長(zhǎng)
貨號(hào)
P-X10450
產(chǎn)品分類
小鼠
規(guī)格
1×106
包裝
株
來源
肝臟
用途
僅供科研研究使用
產(chǎn)品詳情：
種屬來源；小鼠
組織來源；肝臟
生長(zhǎng)特性；貼壁生長(zhǎng)
形態(tài)特征；圓形，不規(guī)則
質(zhì)量檢測(cè)；巨噬細(xì)胞標(biāo)志物（F4/80）熒光染色為陽性，純度高于 90%，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、、酵母和等
產(chǎn)品規(guī)格；5x105cells/T25或1mL凍存管
培養(yǎng)基；小鼠肝kupffer細(xì)胞完全培養(yǎng)基
培養(yǎng)條件；氣相：95%空氣+5%二氧化碳；溫度：37℃
換液頻率；每2-3天換液一次
消化液；0.25%胰蛋白酶
干冰運(yùn)輸及復(fù)蘇好存活細(xì)胞
（1）1mL凍存管包裝干冰運(yùn)輸，收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染，請(qǐng)立即與我們聯(lián)系。（2）T25瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨，收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作。
1）準(zhǔn)備DMEM培養(yǎng)基；胎牛血清，10%；雙抗，1%。
2）培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。
二．細(xì)胞處理：
1）凍存細(xì)胞的復(fù)蘇：：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8ml完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過夜
。天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況和細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。對(duì)于貼壁細(xì)胞傳代可以參考以下方法：1、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2、加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長(zhǎng)消化時(shí)間），然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化。
3、輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的完全培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長(zhǎng)活力，后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。
3）細(xì)胞凍存:收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時(shí)凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。下面T25瓶為例：
1、細(xì)胞凍存時(shí)按照細(xì)胞傳代的過程收集消化好的細(xì)胞到離心管中，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，來決定細(xì)胞的凍存密度。一般細(xì)胞的推薦凍存密度為1×10?~1×10?個(gè)活細(xì)胞/ml.
2、1000rpm離心3-5min，去掉上清。用配制好的細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞 ，按每1ml凍存液含1×10?~1×10?個(gè)活細(xì)胞/ml分配到一個(gè)凍存管中將細(xì)胞分配到凍存管中，標(biāo)注好名稱、代數(shù)、日期等信息。
3、將要凍存的細(xì)胞置于程序降溫盒中，-80度冰箱中過夜，之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲(chǔ)存。同時(shí)記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。
實(shí)驗(yàn)原理：
公司正在出售的產(chǎn)品：
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轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1/TGF β1/TGF-β1抗體 Anti-TGF beta 1 |
絲氨酸蛋白酶抑制劑B4抗體(鱗狀細(xì)胞抗原) Anti-SCCA/SERPINB4 |
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肌萎縮相關(guān)蛋白1抗體 Anti-RERE |
磷酸肌醇相互作用蛋白抗體 |
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肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白Z盤狀蛋白抗體 Anti-Nebulette |
磷酸化異質(zhì)核糖核蛋白K抗體 |
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氨基丁酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白VGAT抗體 Anti-VGAT/SLC32A1 |
Rabbit Anti-Human IgG F(ab')? / Cy5.5 |
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PIRT |
Cy5.5標(biāo)記的兔抗人IgG H&L F(ab')2 |
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熱休克蛋白70蛋白2抗體 |
蛋白酶體PRS10B抗體 Anti-Proteasome 19S 10B |
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HSPA2 |
過氧化物酶體增殖物激活受體γ輔激活子1α+β抗體 Anti-PGC1 alpha + beta |
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組織因子途徑抑制劑抗體 Anti-TFPI/LACI |
phospho-hnRNP K (Ser284) |
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猴子補(bǔ)體蛋白4(C4)elisa生化檢測(cè)試劑盒 |
磷酸化zeta相關(guān)蛋白70抗體 Anti-Phospho-ZAP70 (Tyr493) |
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C4 ELISA kit |
同源盒蛋白NOBOX抗體 Anti-NOBOX |
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人分泌粒蛋白1(嗜鉻粒蛋白B)(CHGB/SCG1)elisa生化檢測(cè)試劑盒 |
核糖核苷酸還原酶1抗體 Anti-RRM1 |
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HumanCHGB/SCG1ELISAkit |
泛素樣蛋白Sumo2/3抗體 Anti-Sumo 2+3 |
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蜥蜴甲狀腺素(T4)elisa檢測(cè)試劑盒免費(fèi)代測(cè) |
干細(xì)胞成脂分化潛力比色法定量檢測(cè)試劑盒 |
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谷類氮含量克爾道（Kjeldahl）法定量檢測(cè)試劑盒 |
Kupffer（小鼠肝枯否細(xì)胞）大鼠乙酰輔酶A elisa檢測(cè)試劑盒免費(fèi)代測(cè) |
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MICAL3蛋白抗體 |
鴨肝炎病毒VP1抗體 |
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MICAL3 |
Duck Hepatitis Virus VP1 |
實(shí)驗(yàn)步驟：
1 將目的基因構(gòu)建到合適的慢病毒載體上，利用293T細(xì)胞進(jìn)行慢病毒包裝，獲得含目的基因的慢病毒；
2 轉(zhuǎn)染前24 h進(jìn)行細(xì)胞鋪板，轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞密度控制在80%左右；
3 天加入適量病毒懸液感染細(xì)胞，并置于37 ℃，5% CO2培養(yǎng)箱中孵育；
4 24 h后用新鮮培養(yǎng)基替換含有病毒的培養(yǎng)基，并繼續(xù)培養(yǎng)；
5 在轉(zhuǎn)染3-4天后開始加藥篩選培養(yǎng)，直至顯微鏡下觀察熒光細(xì)胞比例為100%，獲得穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系。