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細(xì)胞接收后的處理：
1）收到細(xì)胞后，75%酒精瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染，請(qǐng)拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。
2）請(qǐng)?jiān)?或5X顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài)，同時(shí)給剛收到的細(xì)胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為售后時(shí)收到時(shí)細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。
3）貼壁細(xì)胞：細(xì)胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h，顯微鏡下觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)和貼壁情況，有些貼壁細(xì)胞在快遞運(yùn)送過(guò)程中會(huì)因振動(dòng)脫落和脫落后成團(tuán)的情況。若鏡下觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)密度若在60%以下，可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基（若有未貼壁的細(xì)胞需要離心回收，重懸打入到原培養(yǎng)瓶中）,加入新配制的完全培養(yǎng)基6-8mL，放到細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細(xì)胞生長(zhǎng)密度達(dá)70%-80%以上，可以對(duì)細(xì)胞進(jìn)行傳代處理。傳代過(guò)程中，若因運(yùn)輸振動(dòng)脫落的細(xì)胞需要離心回收。
4）備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說(shuō)明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代。
bEnd.3 [BEND3]（小鼠腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞株）
英文簡(jiǎn)稱
規(guī)格
貨號(hào)
bEnd.3 BEND
1×106
P-X10423
產(chǎn)品詳情：
細(xì)胞別稱；bEND.3; b.End3; Bend.3; bEnd3; brain-derived Endothelial cells.3；小鼠微血管內(nèi)皮細(xì)胞
種屬來(lái)源；小鼠
年齡性別；6周齡
組織來(lái)源；腦微血管
生長(zhǎng)特性；貼壁生長(zhǎng)
細(xì)胞形態(tài)；上皮細(xì)胞樣
背景簡(jiǎn)介；細(xì)胞用表達(dá)多瘤病毒中T抗原的NTKmT逆轉(zhuǎn)錄病毒轉(zhuǎn)染進(jìn)行轉(zhuǎn)化。觀察到血管性血友病因子的表達(dá)及對(duì)熒光標(biāo)記的低密度脂蛋白（LDL）的攝入確認(rèn)其內(nèi)皮細(xì)胞特性。bEnd.3 cells細(xì)胞可用細(xì)胞因子和脂多糖(LPS)誘導(dǎo)細(xì)胞的Peyer＇s結(jié)高內(nèi)皮細(xì)胞受體，粘膜血管定居因子(MAdCAM-1) 及內(nèi)皮細(xì)胞選擇素的表達(dá)。腫瘤壞死因子 a (TNF alpha), 白介素 1 (IL-1)或 LPS的誘導(dǎo)作用是濃度及時(shí)間依賴的。
細(xì)胞代數(shù)；10代以內(nèi)
背景介紹；Bend.3細(xì)胞轉(zhuǎn)染了表達(dá)多瘤病毒中T抗原的NTKmT逆轉(zhuǎn)錄病毒載體。
生物等級(jí)；1
細(xì)胞規(guī)格；1×106cells/T25培養(yǎng)瓶或者1mL凍存管包裝
支原體檢測(cè)；無(wú)
保藏機(jī)構(gòu)；ATCC; CRL-2299 BCRC; 60515 ECACC; 96091929
培養(yǎng)基；90%DMEM+10%FBS+PS
培養(yǎng)條件；氣相：95%空氣+5%二氧化碳；溫度：37℃
凍存條件；無(wú)血清凍存液，液氮儲(chǔ)存
干冰運(yùn)輸及復(fù)蘇好存活細(xì)胞
（1）1mL凍存管包裝干冰運(yùn)輸，收到后-80度冰箱保存過(guò)夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染，請(qǐng)立即與我們聯(lián)系。（2）T25瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨，收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作。
1）準(zhǔn)備DMEM培養(yǎng)基；胎牛血清，10%；雙抗，1%。
2）培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。
二．細(xì)胞處理：
1）凍存細(xì)胞的復(fù)蘇：：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8ml完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過(guò)夜
。天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況和細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。對(duì)于貼壁細(xì)胞傳代可以參考以下方法：1、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2、加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長(zhǎng)消化時(shí)間），然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來(lái)終止消化。
3、輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說(shuō)明書要求配置的新的完全培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長(zhǎng)活力，后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。
3）細(xì)胞凍存:收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時(shí)凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。下面T25瓶為例：
1、細(xì)胞凍存時(shí)按照細(xì)胞傳代的過(guò)程收集消化好的細(xì)胞到離心管中，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，來(lái)決定細(xì)胞的凍存密度。一般細(xì)胞的推薦凍存密度為1×10?~1×10?個(gè)活細(xì)胞/ml.
2、1000rpm離心3-5min，去掉上清。用配制好的細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞 ，按每1ml凍存液含1×10?~1×10?個(gè)活細(xì)胞/ml分配到一個(gè)凍存管中將細(xì)胞分配到凍存管中，標(biāo)注好名稱、代數(shù)、日期等信息。
3、將要凍存的細(xì)胞置于程序降溫盒中，-80度冰箱中過(guò)夜，之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲(chǔ)存。同時(shí)記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。
實(shí)驗(yàn)原理：
公司正在出售的產(chǎn)品：
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KLK8ELISAKit |
跨膜蛋白SEMA5B抗體 Anti-SEMA5B/Semaphorin 5B |
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核糖體蛋白S6修飾樣蛋白A抗體 Anti-RIMKLA/FAM80A |
多腺苷二磷酸多聚酶PARP10抗體 |
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神經(jīng)組織特異性F肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白抗體 Anti-Neurabin 1/PPP1R9A |
甲狀旁腺抗體 |
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黃嘌呤氧化酶抗體 Anti-XDH/Xanthine Oxidase |
Rabbit Anti-Chicken IgY / HRP |
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PARP10 |
辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記兔抗雞IgY抗體 |
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HHIP樣蛋白1抗體 |
核苷酸內(nèi)焦磷酸酶/磷酸二酯酶1抗體 Anti-ENPP1/PC1/3 |
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HHIPL1 |
脂滴包被蛋白Perilipin-A抗體 Anti-Perilipin A |
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腫瘤壞死因子配體超家族成員4抗體 Anti-TNFSF4/CD252 |
parathyroid hormone |
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大鼠CXC趨化因子受體5(CXCR5)elisa生化檢測(cè)試劑盒 |
鋅指蛋白568抗體 Anti-ZNF568 |
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CXCR5 ELISA Kit |
利鈉肽受體A抗體 Anti-Natriuretic Peptide Receptor A |
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人睪酮(T)elisa生化檢測(cè)試劑盒 |
抵抗素樣分子α抗體 Anti-RELMa/RELM alpha |
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TELISAKit |
彈性蛋白酶抑制劑抗體 Anti-SKALP/Elafin |
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CCK-8細(xì)胞增殖及細(xì)胞毒性檢測(cè)試劑盒3000T |
革蘭氏陰性菌蛋白提取試劑盒50T |
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小鼠成神經(jīng)細(xì)胞瘤RAS 病毒(v-ras)癌基因同源物elisa生化檢測(cè)試劑盒 |
bEnd.3 [BEND3]（小鼠腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞株）石蠟切片組蛋白H3-K9甲基化組化定量檢測(cè)試劑盒 |
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黑色素瘤相關(guān)抗原6抗體 |
無(wú)精癥缺失相關(guān)蛋白2抗體 |
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MAGEA6 |
DAZAP2 |
實(shí)驗(yàn)步驟：
1 將目的基因構(gòu)建到合適的慢病毒載體上，利用293T細(xì)胞進(jìn)行慢病毒包裝，獲得含目的基因的慢病毒；
2 轉(zhuǎn)染前24 h進(jìn)行細(xì)胞鋪板，轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞密度控制在80%左右；
3 天加入適量病毒懸液感染細(xì)胞，并置于37 ℃，5% CO2培養(yǎng)箱中孵育；
4 24 h后用新鮮培養(yǎng)基替換含有病毒的培養(yǎng)基，并繼續(xù)培養(yǎng)；
5 在轉(zhuǎn)染3-4天后開(kāi)始加藥篩選培養(yǎng)，直至顯微鏡下觀察熒光細(xì)胞比例為100%，獲得穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系。