咨詢(xún)電話(huà):18117197628
干冰運(yùn)輸及復(fù)蘇好存活細(xì)胞
(1)1mL凍存管包裝干冰運(yùn)輸,收到后-80度冰箱保存過(guò)夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇,若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染,請(qǐng)立即與我們聯(lián)系。(2)T25瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨,收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作。
人結(jié)腸癌細(xì)胞帶熒光素酶;SW480/LUC
英文名稱(chēng)
SW480/LUC
產(chǎn)品形態(tài)
上皮細(xì)胞樣 貼壁生長(zhǎng)
貨號(hào)
P-X10685
產(chǎn)品分類(lèi)
人
規(guī)格
1×106
包裝
株
來(lái)源
結(jié)腸
用途
僅供科研研究使用
細(xì)胞特性:
細(xì)胞別稱(chēng);Sw480-LUC;人結(jié)腸癌細(xì)胞株-LUC;人結(jié)腸腺癌細(xì)胞-熒光素酶標(biāo)記
種屬來(lái)源;人
組織來(lái)源;結(jié)腸
生長(zhǎng)特性;貼壁生長(zhǎng)
細(xì)胞形態(tài);上皮細(xì)胞樣
細(xì)胞代數(shù);p3-p8
特別注意;SW480-LUC細(xì)胞培養(yǎng)不能通入CO2,如果沒(méi)有條件準(zhǔn)備空氣氣相100%的培養(yǎng)箱,可以采用不透氣密封蓋的T25培養(yǎng)瓶來(lái)培養(yǎng),培養(yǎng)過(guò)程中每天將細(xì)胞拿出培養(yǎng)箱換1-2次空氣
背景介紹;Luciferase SW480細(xì)胞穩(wěn)定表達(dá)螢火蟲(chóng)熒光素酶。該細(xì)胞株性狀穩(wěn)定,培養(yǎng)時(shí)不需要添加維持。可用作螢火蟲(chóng)熒光素酶活性檢測(cè)中的陽(yáng)性對(duì)照,也可用于活體動(dòng)物成像實(shí)驗(yàn)。SW480細(xì)胞通過(guò)慢病毒轉(zhuǎn)染的方式攜帶Luc基因。SW480源自原位直腸腺癌,和SW620細(xì)胞源自同一病人一年后的結(jié)轉(zhuǎn)移。CSAp和直腸抗體3陰性角蛋白過(guò)氧化物酶染色陽(yáng)性。p53基因第273位密碼子的G&rarrA突變引起Arg&rarrHis替代,309位密碼子的C&rarrT突變導(dǎo)致Pro&rarrSer替代。細(xì)胞p53蛋白表達(dá)水平,癌基因c-myc、K-ras、H-ras、N-ras、myb、sis和fos的表達(dá)呈陽(yáng)性,癌基因N-myc的表達(dá)未做檢測(cè)。SW480 [SW-480]細(xì)胞不表達(dá)細(xì)胞溶解酶,一種與腫瘤入侵相關(guān)的金屬蛋白酶。有報(bào)道稱(chēng),SW480 [SW-480]細(xì)胞表達(dá)GM-CSF。SW480 [SW-480]細(xì)胞ras原癌基因的12位密碼子有一個(gè)突變,可以用作PCR法檢測(cè)該突變的陽(yáng)性對(duì)照。1978年11月,A·Leibovitz將其提交給ATCC時(shí)已傳代至第91代。
生物等級(jí);1
細(xì)胞規(guī)格;1x106cells/T25培養(yǎng)瓶或者1mL凍存管包裝
支原體檢測(cè);無(wú)
保藏機(jī)構(gòu);ATCC; CCL-228 DSMZ; ACC-313 ECACC; 87092801
培養(yǎng)基;90%L-15+10% FBS+PS+1.0ug/ml puro
培養(yǎng)條件;氣相:100%空氣;溫度:37℃
凍存條件;無(wú)血清凍存液,液氮儲(chǔ)存
細(xì)胞接收后的處理:
1)收到細(xì)胞后,75%酒精瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染,請(qǐng)拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。
2)請(qǐng)?jiān)?或5X顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài),同時(shí)給剛收到的細(xì)胞拍照(10×,20×)各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存,作為售后時(shí)收到時(shí)細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)
3)貼壁細(xì)胞:細(xì)胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h,顯微鏡下觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)和貼壁情況,有些貼壁細(xì)胞在快遞運(yùn)送過(guò)程中會(huì)因振動(dòng)脫落和脫落后成團(tuán)的情況。若鏡下觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)密度若在60%以下,可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基(若有未貼壁的細(xì)胞需要離心回收,重懸打入到原培養(yǎng)瓶中),加入新配制的完全培養(yǎng)基6-8mL,放到細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細(xì)胞生長(zhǎng)密度達(dá)70%-80%以上,可以對(duì)細(xì)胞進(jìn)行傳代處理。傳代過(guò)程中,若因運(yùn)輸振動(dòng)脫落的細(xì)胞需要離心回收。
4)備注:運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞,請(qǐng)換用按照說(shuō)明書(shū)細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。 收到細(xì)胞后次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1:2傳代 。
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1) 準(zhǔn)備MEM(推薦iCell-0012)培養(yǎng)基;胎牛血清,10%;雙抗,1%。
2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3) 凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。
二、細(xì)胞培養(yǎng)操作:
1) 復(fù)蘇細(xì)胞:將含有 1 mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,加 4 mL 培養(yǎng)基混 合均勻。在 1000 rpm 條件下離心 3 min,棄去上清液,加 1-2 mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有 細(xì)胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜 (或?qū)⒓?xì)胞懸液加入 6 cm 皿中,加入約 4 mL 培養(yǎng)基,培養(yǎng)過(guò)夜) 。天換液并檢查細(xì)胞密度。
2) 細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。 a、棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤(rùn)洗細(xì)胞 1-2 次。
b、加 1 mL 消化液 (0.25%Trypsin-0.53mM EDTA) 于培養(yǎng)瓶中,使消化液浸潤(rùn)所有細(xì)胞,棄去 消化液,將培養(yǎng)瓶置于 37℃培養(yǎng)箱中消化 1 -3min (視細(xì)胞消化情況而定) ,然后在顯微鏡下 觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加2-3ml完全培養(yǎng)基終止消化。輕輕打勻后裝入無(wú)菌離心管中,1000 rpm離心5 min,棄去上清液,補(bǔ)加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。 。
c、將細(xì)胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
3) 細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為例;
a、收集細(xì)胞,裝入無(wú)菌離心管中,1000 rpm 條件下離心 4 min,棄去上清液, 用 PBS 清洗一遍,棄盡 PBS,進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。
b、根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無(wú)血清細(xì)胞凍存液,使細(xì)胞密度 5×106~1×107/mL,輕輕混勻,每支凍 存管凍存 1mL 細(xì)胞懸液,注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。
c、將凍存管放入-80℃冰箱,24 h 后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
公司正在出售的產(chǎn)品:
小鼠胃動(dòng)素(MTL)elisa檢測(cè)試劑盒 |
鋅指蛋白598抗體 Anti-ZNF598 |
大鼠巨噬細(xì)胞炎癥蛋白1α(MIP-1α/CCL3)elisa生化檢測(cè)試劑盒 |
人乙肝病毒Large S蛋白抗體 |
組蛋白脫乙酰化酶6(HDAC6)活性比色法定量檢測(cè)試劑盒 |
E3泛素蛋白連接酶COP1抗體 |
人脂蛋白脂肪酶(LPL)elisa檢測(cè)試劑盒 |
SFXN2 |
large S protein |
SFXN2蛋白抗體 |
BEND2蛋白抗體 |
磷酸化mTOR相關(guān)調(diào)控蛋白抗體 Anti-Phospho-Raptor (Ser792) |
BEND2 |
NADH氧化還原酶輔酶1抗體 Anti-NDUFA1 |
激活素受體1A抗體 Anti-SKR1/ACTR1 |
COP1 |
驢抗豚鼠IgG H&L抗血清 |
絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶31抗體 Anti-STK31 |
Donkey Anti-Guinea Pig IgG H&L whole serum |
腺苷酸硫酸激酶2抗體 Anti-PAPSS2 |
鋅指蛋白75抗體 |
多腺苷二磷酸多聚酶3抗體/多聚ADP-核糖聚合酶3 Anti-PARP3 |
ZNF75 |
腫瘤壞死因子受體超家族成員13B抗體 Anti-TNFRSF13B |
雞白介素4(IL-4)elisa生化檢測(cè)試劑盒 |
小鼠白喉IgG抗體elisa生化檢測(cè)試劑盒 |
IL-4 ELISA Kit |
人結(jié)腸癌細(xì)胞帶熒光素酶;SW480/LUCMouseDiphtheriaIgGantibodyELISAKit |
魚(yú)促甲狀腺素(TSH)elisa生化檢測(cè)試劑盒 |
人丙酰輔酶A羧化酶β多肽(PCCB)elisa生化檢測(cè)試劑盒 |
TSH ELISA Kit |
HumanPCCBELISAKit |
三、培養(yǎng)注意事項(xiàng):
1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好,培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象,若有上述現(xiàn)象 發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系。
2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說(shuō)明書(shū),了解細(xì)胞相關(guān)信息,如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需 細(xì)胞因子等,確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致,若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問(wèn)題,責(zé)任由 客戶(hù)自行承擔(dān)。
3. 用 75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面,顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問(wèn)題,部分細(xì)胞由于溫度 變化及劇烈碰撞死亡破碎形成碎片,是正?,F(xiàn)象。觀察好細(xì)胞狀態(tài)后,75%酒精瓶壁將 T25 瓶置于 37℃培養(yǎng)箱放置 2-4h。
4. 貼壁細(xì)胞可以消化,懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞,900 rpm-1000 rpm 離心 3 min,棄上 清。加 5 mL PBS 重懸細(xì)胞,再 900 rpm-1000 rpm 離心 3 min,,用新鮮的完全培養(yǎng)基重懸 細(xì)胞,并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中,置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。
5. 請(qǐng)客戶(hù)用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。
6. 建議客戶(hù)收到細(xì)胞后前 3 天各拍幾張細(xì)胞照片,記錄細(xì)胞狀態(tài),便于和我司技術(shù)部溝通 交流。由于運(yùn)輸?shù)脑?,個(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況,請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系,告知細(xì)胞 的具體情況,以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪(fǎng)直至問(wèn)題解決。
7. 該細(xì)胞僅供科研使用。
8. 備注:運(yùn)輸用的培養(yǎng)基 (灌液培養(yǎng)基) 不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞,請(qǐng)換用按照說(shuō)明書(shū)細(xì)胞培 養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議 1:2 傳代 。
9. 注意: 1:2 傳代就是 1 個(gè) T25 瓶傳 2 個(gè) T25 瓶或者 2 個(gè) 6cm 皿。不是 1 個(gè) T25 瓶傳 2 個(gè)10cm 皿。