Lncap(前列腺癌細胞)

英文名稱	Lncap	產(chǎn)品形態(tài)	上皮細胞樣 貼壁生長
貨號	P-X10383	產(chǎn)品分類	人
規(guī)格	1×106	包裝	株
來源	前列腺；左鎖骨結癌轉(zhuǎn)移灶	用途	僅供科研研究使用

細胞特性：

細胞別稱；LNCaP；人前列腺癌細胞

種屬來源；人

年齡性別；男；50歲

組織來源；前列腺；左鎖骨結癌轉(zhuǎn)移灶

生長特性；貼壁生長

細胞形態(tài)；上皮細胞樣

細胞代數(shù)；10代以內(nèi)

背景介紹；LNCaP細胞由HoroszewiczJS于1977年從一名50歲的明確診斷為轉(zhuǎn)移性前列腺癌的白人男性患者的左鎖骨上結細針穿刺的活體組織中分離建立的。5-α-雙氫睪酮可影響該細胞的生長和酸性磷酸酶的產(chǎn)生。該細胞不形成均一的單層而是成簇生長，所以傳代的時候要反復吹打形成單個細胞；該細胞貼壁不牢，達不到匯合狀態(tài)，而且會使培養(yǎng)基迅速變酸；傳代后48h內(nèi)一定要保持培養(yǎng)瓶靜止，如果此時挪動培養(yǎng)瓶，會使大部分細胞從瓶底脫落。如果出現(xiàn)此種情況，需要重新孵育24~48h使細胞重新貼壁，細胞貼壁后可更換培養(yǎng)基。

特別注意；1. LNCaP細胞長得較慢，復蘇和傳代后需24-48小時貼壁。該細胞貼壁不牢，僅僅輕輕地吸附在皿底上，不形成匯合，很快使培養(yǎng)基變酸。生長很慢，傳代后48小時內(nèi)不應移動。2.細胞封包、寄出時，罐裝運輸后通常多數(shù)細胞從培養(yǎng)瓶底分離，懸浮在培養(yǎng)基中。收到后，在通常培養(yǎng)單層細胞的條件下培養(yǎng)24到48小時，以使細胞再貼壁，此后換上新鮮培養(yǎng)液。如仍有細胞漂浮，需將培養(yǎng)瓶內(nèi)容物收集，800rpm離心5分鐘，用新鮮培養(yǎng)液重懸并培養(yǎng)到一個6cm培養(yǎng)皿或T25培養(yǎng)瓶中。

STR位點信息；Amelogenin：X，Y；CSF1PO：10，11；D13S317：10，12；D16S539：11；D18S51：9，11，12；D19S433：13.2，15；D21S11：29，32.2；D2S1338：16，17；D3S1358：16；D5S818：11，12；D7S820：8.1，9.1，10.3；D8S1179：12，14；FGA：19，20；TH01：9；TPOX：8，9；vWA：16，18；

使用權限；A類

細胞規(guī)格；1×106cells/T25培養(yǎng)瓶或者1mL凍存管包裝

支原體檢測；無

保藏機構；中國醫(yī)學科學院基礎醫(yī)學研究所細胞資源中心

培養(yǎng)基；RPMI-1640+ FBS 10%+p/s 1%

培養(yǎng)條件；氣相：95%空氣+5%二氧化碳；溫度：37℃

凍存條件；無血清凍存液，液氮儲存

干冰運輸及復蘇好存活細胞

細胞接收后的處理：
1）收到細胞后，75%酒精瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細胞有污染，請拍照后及時聯(lián)系我們。
2）請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態(tài)，同時給剛收到的細胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為售后時收到時細胞狀態(tài)的依據(jù)
3）貼壁細胞：細胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h，顯微鏡下觀察細胞的生長和貼壁情況，有些貼壁細胞在快遞運送過程中會因振動脫落和脫落后成團的情況。若鏡下觀察細胞的生長密度若在60%以下，可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基（若有未貼壁的細胞需要離心回收，重懸打入到原培養(yǎng)瓶中）,加入新配制的完全培養(yǎng)基6-8mL，放到細胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細胞生長密度達70%-80%以上，可以對細胞進行傳代處理。傳代過程中，若因運輸振動脫落的細胞需要離心回收。
4）備注：運輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。  收到細胞后次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代 。                      
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1） 準備MEM（推薦iCell-0012）培養(yǎng)基；胎牛血清，10%；雙抗，1%。
2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。

二、細胞培養(yǎng)操作:

1) 復蘇細胞：將含有 1 mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 4 mL 培養(yǎng)基混 合均勻。在 1000 rpm 條件下離心 3 min，棄去上清液，加 1-2 mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有 細胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜 (或?qū)⒓毎麘乙杭尤?6 cm 皿中，加入約 4 mL 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜) 。天換液并檢查細胞密度。
2) 細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。 a、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。
b、加 1 mL 消化液 (0.25%Trypsin-0.53mM EDTA) 于培養(yǎng)瓶中，使消化液浸潤所有細胞，棄去 消化液，將培養(yǎng)瓶置于 37℃培養(yǎng)箱中消化 1 -3min (視細胞消化情況而定) ，然后在顯微鏡下 觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加2-3ml完全培養(yǎng)基終止消化。輕輕打勻后裝入無菌離心管中，1000 rpm離心5 min，棄去上清液，補加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。        。
c、將細胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
3) 細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為例；
a、收集細胞，裝入無菌離心管中，1000 rpm 條件下離心 4 min，棄去上清液， 用 PBS 清洗一遍，棄盡 PBS，進行細胞計數(shù)。
b、根據(jù)細胞數(shù)量加入無血清細胞凍存液，使細胞密度 5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍 存管凍存 1mL 細胞懸液，注意凍存管做好標識。
c、將凍存管放入-80℃冰箱，24 h 后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
三、培養(yǎng)注意事項:

1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象 發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。 
2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關信息，如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需 細胞因子等，確保細胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導致細胞出現(xiàn)問題，責任由 客戶自行承擔。 
3. 用 75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題，部分細胞由于溫度 變化及劇烈碰撞死亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象。觀察好細胞狀態(tài)后，75%酒精瓶壁將 T25 瓶置于 37℃培養(yǎng)箱放置 2-4h。 
4. 貼壁細胞可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞，900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，棄上 清。加 5 mL PBS 重懸細胞，再 900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，，用新鮮的完全培養(yǎng)基重懸 細胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。 
5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細胞培養(yǎng)。 
6. 建議客戶收到細胞后前 3 天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和我司技術部溝通 交流。由于運輸?shù)脑?，個別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，告知細胞 的具體情況，以便我們的技術人員跟蹤回訪直至問題解決。 
7. 該細胞僅供科研使用。 
8. 備注：運輸用的培養(yǎng)基 (灌液培養(yǎng)基) 不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培 養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。收到細胞后次傳代建議 1：2 傳代 。 
9. 注意：  1:2 傳代就是 1 個 T25 瓶傳 2 個 T25 瓶或者 2 個 6cm 皿。不是 1 個 T25 瓶傳 2 個10cm 皿。

公司正在出售的產(chǎn)品：

人T細胞急性母細胞白血病相關抗原(TALLA-1/CD231)elisa檢測試劑盒免費代測	雌調(diào)節(jié)蛋白LIV1/鋅轉(zhuǎn)運蛋白抗體  Anti-LIV-1/SLC39A6
組織糖原磷酸化酶（GLYCOGEN PHOSPHORYLASE）活性	回腸絨毛刷狀緣膜蛋白抗體
小鼠糖蛋白130(gp130)elisa檢測試劑盒	DIP2C蛋白抗體
大鼠堿性成纖維生長因子(bFGF)elisa生化檢測試劑盒	英文名
NAALADL1	中文名
3號染色體開放閱讀框65抗體	磷酸化P21蛋白激活的蛋白激酶6  Anti-phospho-PAK6(Ser165)
C3orf65	Nemo樣激酶抗體  Anti-Nemo-like kinase
轉(zhuǎn)錄增強因子TEF4抗體  Anti-TEF4/TEA domain family member 2	DIP2C
大鼠催乳素(PRL)elisa生化檢測試劑盒	膽固醇調(diào)節(jié)元件結合蛋白2抗體  Anti-SREBP-2
PRL ELISA Kit	孤菲肽/痛敏肽抗體  Anti-Nociceptin
人結締組織活化肽Ⅲ(CTAPⅢ)elisa生化檢測試劑盒	磷酸化原癌基因酪氨酸蛋白激酶受體RET抗體  Anti-phospho-Ret/HSCR1(Tyr1062)
CTAPⅢELISAKit	酮基移換酶樣蛋白1抗體  Anti-TKTL1
6-磷酸葡萄糖脫氫酶（G6PDH）/葡萄糖-6-磷酸脫氫酶測試盒	大鼠胰島素樣生長因子結合蛋白5(IGFBP-5)elisa檢測試劑盒
小鼠Toll樣受體4(TLR4)elisa檢測試劑盒	Lncap(前列腺癌細胞)CASPASE-5蛋白表達西方雜交分析試劑盒
鉀通道四聚體結構域蛋白11抗體	芳香基硫酸酯酶F抗體
KCTD11	ARSF