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細(xì)胞接收后的處理：
1）收到細(xì)胞后，75%酒精瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染，請拍照后及時聯(lián)系我們。
2）請在4或5X顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài)，同時給剛收到的細(xì)胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為售后時收到時細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。
3）貼壁細(xì)胞：細(xì)胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h，顯微鏡下觀察細(xì)胞的生長和貼壁情況，有些貼壁細(xì)胞在快遞運(yùn)送過程中會因振動脫落和脫落后成團(tuán)的情況。若鏡下觀察細(xì)胞的生長密度若在60%以下，可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基（若有未貼壁的細(xì)胞需要離心回收，重懸打入到原培養(yǎng)瓶中）,加入新配制的完全培養(yǎng)基6-8mL，放到細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細(xì)胞生長密度達(dá)70%-80%以上，可以對細(xì)胞進(jìn)行傳代處理。傳代過程中，若因運(yùn)輸振動脫落的細(xì)胞需要離心回收。
4）備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代。
英文簡稱
規(guī)格
貨號
RT11284：RT112/84
1×106
P-X10123
產(chǎn)品詳情：
細(xì)胞別稱；HCT-116; HCT.116; HCT_116; HCT116; CoCL2；人結(jié)腸癌細(xì)胞
種屬來源；人
年齡性別；男；成年
組織來源；結(jié)直腸癌
生長特性；貼壁生長
細(xì)胞形態(tài)；上皮細(xì)胞樣
細(xì)胞代數(shù)；10代以內(nèi)
背景介紹；HCT116是1979年M.Brattain等從患結(jié)腸癌的男性病人中分離的三株惡性細(xì)胞之一。 在半固體瓊脂糖培養(yǎng)基中形成克隆。HCT116在無胸腺的裸鼠有致瘤性，形成上皮樣的腫瘤。
生物等級；1
細(xì)胞規(guī)格；1×106cells/T25培養(yǎng)瓶或者1mL凍存管包裝
支原體檢測；無
保藏機(jī)構(gòu)；ATCC; CCL-247 BCRC; 60349 BCRJ; 0288 DSMZ; ACC-581
培養(yǎng)基；McCoy's 5a+10% FBS+PS
培養(yǎng)條件；氣相：95%空氣+5%二氧化碳；溫度：37℃
凍存條件；無血清凍存液，液氮儲存
倍增時間；~25-48 hours
致瘤性；Yes, in nude mice.
基因表達(dá)情況；carcinoembryonic antigen (CEA) 1 ng per 1×10^6 cells per 10 days.
干冰運(yùn)輸及復(fù)蘇好存活細(xì)胞
（1）1mL凍存管包裝干冰運(yùn)輸，收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。（2）T25瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨，收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作。
1）準(zhǔn)備DMEM培養(yǎng)基；胎牛血清，10%；雙抗，1%。
2）培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。
二．細(xì)胞處理：
1）凍存細(xì)胞的復(fù)蘇：：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8ml完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過夜
。天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況和細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。對于貼壁細(xì)胞傳代可以參考以下方法：1、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2、加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長消化時間），然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化。
3、輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的完全培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長活力，后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。
3）細(xì)胞凍存:收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。下面T25瓶為例：
1、細(xì)胞凍存時按照細(xì)胞傳代的過程收集消化好的細(xì)胞到離心管中，可使用血球計數(shù)板計數(shù)，來決定細(xì)胞的凍存密度。一般細(xì)胞的推薦凍存密度為1×10?~1×10?個活細(xì)胞/ml.
2、1000rpm離心3-5min，去掉上清。用配制好的細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞 ，按每1ml凍存液含1×10?~1×10?個活細(xì)胞/ml分配到一個凍存管中將細(xì)胞分配到凍存管中，標(biāo)注好名稱、代數(shù)、日期等信息。
3、將要凍存的細(xì)胞置于程序降溫盒中，-80度冰箱中過夜，之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲存。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。
實(shí)驗(yàn)原理：
公司正在出售的產(chǎn)品：
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小鼠腫瘤壞死因子β(TNFβ)elisa檢測試劑盒 |
小鼠磷酸化細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)激酶(pERK)elisa生化檢測試劑盒 |
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大鼠肌酸激酶同工酶MM(CK-MM)elisa生化檢測試劑盒 |
A型H1N1流感病毒神經(jīng)氨酸酶抗體 |
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組織ROCK-I激酶活性定量檢測試劑盒（A/B/C） |
CD84抗體 |
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人肌質(zhì)/內(nèi)質(zhì)網(wǎng)鈣ATP酶(ATP2A1)elisa生化檢測試劑盒 |
protein 4.2 |
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Influenza A H1N1 Neuraminidase |
紅細(xì)胞膜蛋白4.2抗體 |
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錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白20A3抗體 |
人16α羥基雌酮1(16-α OHE-1)elisa生化檢測試劑盒 |
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ANKRD20A3 |
大鼠Ⅰ型膠原交聯(lián)氨基端肽(NTXⅠ)elisa檢測試劑盒 |
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非同位素HRP化學(xué)發(fā)光法DNA南方雜交印跡完全試劑盒 |
CD84 |
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辣根過氧化物酶標(biāo)記的羊抗大鼠IgG H&L |
神經(jīng)突起誘導(dǎo)因子受體UNC5B抗體 Anti-UNC5B/UNC5H2 |
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Goat Anti-Rat IgG H&L / HRP |
血小板衍化生長因子β抗體 Anti-PAFAH1B2 |
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鋅結(jié)合乙醇脫氫酶結(jié)構(gòu)域蛋白2抗體 |
蛋白質(zhì)精氨酸亞型2抗體 Anti-PADI2/PAD2 |
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ZADH2 |
脂肪酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白5抗體 Anti-SLC27A5 |
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犬CD6分子(CD6)elisa生化檢測試劑盒 |
小鼠含球蛋白樣環(huán)和上皮生長因子樣域酪氨酸激酶2(Tie-2)elisa生化檢測試劑盒 |
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CD6 ELISA Kit |
HCT-116人結(jié)腸癌細(xì)胞Tie-2ELISAkit |
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猴促腎上皮質(zhì)釋放(CRH)elisa生化檢測試劑盒 |
人二磷酸腺苷(ADP)elisa生化檢測試劑盒 |
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CRH ELISA kit |
ADPELISAkit |
實(shí)驗(yàn)步驟：
1 將目的基因構(gòu)建到合適的慢病毒載體上，利用293T細(xì)胞進(jìn)行慢病毒包裝，獲得含目的基因的慢病毒；
2 轉(zhuǎn)染前24 h進(jìn)行細(xì)胞鋪板，轉(zhuǎn)染時細(xì)胞密度控制在80%左右；
3 天加入適量病毒懸液感染細(xì)胞，并置于37 ℃，5% CO2培養(yǎng)箱中孵育；
4 24 h后用新鮮培養(yǎng)基替換含有病毒的培養(yǎng)基，并繼續(xù)培養(yǎng)；
5 在轉(zhuǎn)染3-4天后開始加藥篩選培養(yǎng)，直至顯微鏡下觀察熒光細(xì)胞比例為100%，獲得穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系。