咨詢(xún)電話(huà)：18117197628
細(xì)胞接收后的處理：
1）收到細(xì)胞后，75%酒精瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染，請(qǐng)拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。
2）請(qǐng)?jiān)?或5X顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài)，同時(shí)給剛收到的細(xì)胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為售后時(shí)收到時(shí)細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。
3）貼壁細(xì)胞：細(xì)胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h，顯微鏡下觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)和貼壁情況，有些貼壁細(xì)胞在快遞運(yùn)送過(guò)程中會(huì)因振動(dòng)脫落和脫落后成團(tuán)的情況。若鏡下觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)密度若在60%以下，可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基（若有未貼壁的細(xì)胞需要離心回收，重懸打入到原培養(yǎng)瓶中）,加入新配制的完全培養(yǎng)基6-8mL，放到細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細(xì)胞生長(zhǎng)密度達(dá)70%-80%以上，可以對(duì)細(xì)胞進(jìn)行傳代處理。傳代過(guò)程中，若因運(yùn)輸振動(dòng)脫落的細(xì)胞需要離心回收。
4）備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說(shuō)明書(shū)細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代。
A549+luc 人肺癌細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記
英文簡(jiǎn)稱(chēng)
規(guī)格
貨號(hào)
A549+luc:A549luc
1×106
P-X649
產(chǎn)品詳情：
細(xì)胞介紹
該細(xì)胞系由D.J.Griad通過(guò)肺癌組織移植培養(yǎng)建系，患者為58歲白人男性。A549能通過(guò)胞苷二磷酸膽堿途徑合成含有高含量不飽和脂肪酸的卵磷脂。
該細(xì)胞通過(guò)慢病毒轉(zhuǎn)染的方式攜帶Luc基因。
細(xì)胞特性
1） 來(lái)源：肺癌
2） 形態(tài)：上皮細(xì)胞樣，多角形；貼壁生長(zhǎng)
3） 含量：>1×10? 細(xì)胞數(shù)
4） 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝
5） 用途：僅供科研使用
細(xì)胞誘導(dǎo)構(gòu)建實(shí)驗(yàn)步驟：
1. 轉(zhuǎn)染 （1）將A549細(xì)胞接種6孔板，每孔細(xì)胞數(shù)約為1×10? 個(gè)，
（2）細(xì)胞融合度為50%左右時(shí)用于病毒轉(zhuǎn)染，
（3）加入1mL培養(yǎng)基，再加20 μL Luciferase過(guò)表達(dá)慢病毒，
（4）混勻后繼續(xù)培養(yǎng)，
（5）12h后觀察細(xì)胞狀態(tài)，并更換為新鮮培養(yǎng)基，
（6）當(dāng)細(xì)胞長(zhǎng)滿(mǎn)板底后，傳代至T25培養(yǎng)瓶中。
2. 篩選：用嘌呤霉素4ug/mL抗性篩選6周，穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞記作A549+Luc。
3. 體外熒光素酶活性檢測(cè)
干冰運(yùn)輸及復(fù)蘇好存活細(xì)胞
（1）1mL凍存管包裝干冰運(yùn)輸，收到后-80度冰箱保存過(guò)夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染，請(qǐng)立即與我們聯(lián)系。（2）T25瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨，收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作。
1）準(zhǔn)備DMEM培養(yǎng)基；胎牛血清，10%；雙抗，1%。
2）培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。
二．細(xì)胞處理：
1）凍存細(xì)胞的復(fù)蘇：：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8ml完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過(guò)夜
。天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況和細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。對(duì)于貼壁細(xì)胞傳代可以參考以下方法：1、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2、加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長(zhǎng)消化時(shí)間），然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來(lái)終止消化。
3、輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說(shuō)明書(shū)要求配置的新的完全培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長(zhǎng)活力，后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。
3）細(xì)胞凍存:收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時(shí)凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。下面T25瓶為例：
1、細(xì)胞凍存時(shí)按照細(xì)胞傳代的過(guò)程收集消化好的細(xì)胞到離心管中，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，來(lái)決定細(xì)胞的凍存密度。一般細(xì)胞的推薦凍存密度為1×10?~1×10?個(gè)活細(xì)胞/ml.
2、1000rpm離心3-5min，去掉上清。用配制好的細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞 ，按每1ml凍存液含1×10?~1×10?個(gè)活細(xì)胞/ml分配到一個(gè)凍存管中將細(xì)胞分配到凍存管中，標(biāo)注好名稱(chēng)、代數(shù)、日期等信息。
3、將要凍存的細(xì)胞置于程序降溫盒中，-80度冰箱中過(guò)夜，之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲(chǔ)存。同時(shí)記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。
實(shí)驗(yàn)原理：
公司正在出售的產(chǎn)品：
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HEAT重復(fù)內(nèi)含蛋白5A蛋白抗體 HEATR5A |
纖維母細(xì)胞生長(zhǎng)因子4抗體 FGF4 |
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IQSEC2抗體 IQSEC2 |
BRD3蛋白抗體 BRD3 |
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配體依賴(lài)核受體共抑制因子樣蛋白抗體 LCORL |
白介素17受體抗體 IL17RA |
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橋粒糖蛋白1/2抗體 Desmocollin 1 + 2 |
γ干擾素誘導(dǎo)蛋白202抗體 IFI202 |
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CD39重組兔單克隆抗體 CD39/ENTPD1 |
線(xiàn)粒體蘋(píng)果酸脫氫酶2抗體 MDH2 |
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離子型谷氨酸受體4抗體 GLUR4 |
軸突蛋白3 beta抗體 Neurexin-3-beta |
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磷酸化CREB轉(zhuǎn)錄共激 Phospho-CRTC1 (Ser151) |
睪丸特異絲氨酸/蘇氨酸激酶6抗體 TSSK6 |
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腫瘤壞死因子受體相互作用蛋白抗體 TRIP |
骨形態(tài)發(fā)生蛋白4抗體 BMP4 |
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冰凍切片組織DAP KINASE蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測(cè)試劑盒 |
L型氨基酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白2抗體 LAT2 |
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大鼠整合素αM型((ITG αM/CD11b)elisa檢測(cè)試劑盒 |
MS4A4E蛋白抗體 MS4A4E |
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糞便副傷A（Salmonella Paratyphi A）定性基因檢測(cè)試劑盒 |
人瘤病毒18型E4抗體 HPV18 E4 |
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小鼠γ分泌酶elisa分析檢測(cè)試劑盒 |
軟骨相關(guān)蛋白CRTAP抗體 CRTAP |
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人EB病毒衣殼抗原(EBVCA)抗體(IgM)elisa檢測(cè)試劑盒 |
小鼠醛固酮(ALD)elisa分析檢測(cè)試劑盒 |
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細(xì)胞CASEIN KINASE 1激酶活性定量檢測(cè)試劑盒（A/B/C） |
A549+luc 人肺癌細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記大鼠含球蛋白樣環(huán)和上皮生長(zhǎng)因子樣域酪氨酸激酶2(Tie-2)elisa分析檢測(cè)試劑盒 |
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?；D(zhuǎn)移酶（AAT）測(cè)試盒 |
昆蟲(chóng)膜蛋白提取試劑盒50T |
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小鼠過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體α(PPAR-α)elisa檢測(cè)試劑盒免費(fèi)代測(cè) |
冰凍切片結(jié)締組織（CONNECTIVE TISSUE）格莫瑞（Gomori）染色試劑盒 |
實(shí)驗(yàn)步驟：
1 將目的基因構(gòu)建到合適的慢病毒載體上，利用293T細(xì)胞進(jìn)行慢病毒包裝，獲得含目的基因的慢病毒；
2 轉(zhuǎn)染前24 h進(jìn)行細(xì)胞鋪板，轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞密度控制在80%左右；
3 天加入適量病毒懸液感染細(xì)胞，并置于37 ℃，5% CO2培養(yǎng)箱中孵育；
4 24 h后用新鮮培養(yǎng)基替換含有病毒的培養(yǎng)基，并繼續(xù)培養(yǎng)；
5 在轉(zhuǎn)染3-4天后開(kāi)始加藥篩選培養(yǎng)，直至顯微鏡下觀察熒光細(xì)胞比例為100%，獲得穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系。