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細胞接收后的處理：
1）收到細胞后，75%酒精瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，若發(fā)現培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細胞有污染，請拍照后及時聯系我們。
2）請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態(tài)，同時給剛收到的細胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為售后時收到時細胞狀態(tài)的依據。
3）貼壁細胞：細胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h，顯微鏡下觀察細胞的生長和貼壁情況，有些貼壁細胞在快遞運送過程中會因振動脫落和脫落后成團的情況。若鏡下觀察細胞的生長密度若在60%以下，可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基（若有未貼壁的細胞需要離心回收，重懸打入到原培養(yǎng)瓶中）,加入新配制的完全培養(yǎng)基6-8mL，放到細胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細胞生長密度達70%-80%以上，可以對細胞進行傳代處理。傳代過程中，若因運輸振動脫落的細胞需要離心回收。
4）備注：運輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。收到細胞后次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代。
英文簡稱
規(guī)格
貨號
NIH/3T3:NIH3T3
1×106
P-X1090
產品詳情：
生長特性 貼壁細胞
細胞形態(tài) 成纖維細胞樣
生長培養(yǎng)基 DMEM＋10% CS＋1% P/S
凍存條件
凍存液：55% 基礎培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO
溫度：液氮
培養(yǎng)條件
氣相：空氣，95%；CO2，5%
溫度：37℃
推薦傳代比例 1:3-1:4
推薦換液頻率 2~3次/周
背景描述 NIH/3T3細胞是從NIH Swiss小鼠胚胎培養(yǎng)物中建立的高度接觸性抑制的連續(xù)傳代細胞株。為了培育在形態(tài)學特征上更適合于進行轉化分析的亞株，建立的NIH/3T3細胞株又進行了5輪以上亞克隆。NIH/3T3細胞對肉瘤病毒的轉化灶形成和白血病病毒的繁殖高度敏感，對DNA轉化及轉染研究十分有用；NIH/3T3細胞鼠痘病毒陰性。
年齡（性別） 胚胎
組織來源 胚胎
細胞類型 自發(fā)永生化細胞
生物等級 1
倍增時間 ~20小時
保藏機構 ATCC; CRL-1658 ATCC; CRL-6442DSMZ; ACC-59 ECACC; 93061524
干冰運輸及復蘇好存活細胞
（1）1mL凍存管包裝干冰運輸，收到后-80度冰箱保存過夜后轉入液氮或直接復蘇，若發(fā)現干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯系。（2）T25瓶復蘇的存活細胞常溫發(fā)貨，收到后按照細胞接收后的處理方法操作。
1）準備DMEM培養(yǎng)基；胎牛血清，10%；雙抗，1%。
2）培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配。
二．細胞處理：
1）凍存細胞的復蘇：：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，完全培養(yǎng)基重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8ml完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過夜
。天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。對于貼壁細胞傳代可以參考以下方法：1、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2、加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細胞可以適當延長消化時間），然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化。
3、輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的完全培養(yǎng)基以保持細胞的生長活力，后續(xù)傳代根據實際情況按1:2~1:5的比例進行。
3）細胞凍存:收到細胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細胞種子以備后續(xù)實驗使用。下面T25瓶為例：
1、細胞凍存時按照細胞傳代的過程收集消化好的細胞到離心管中，可使用血球計數板計數，來決定細胞的凍存密度。一般細胞的推薦凍存密度為1×10?~1×10?個活細胞/ml.
2、1000rpm離心3-5min，去掉上清。用配制好的細胞凍存液重懸細胞 ，按每1ml凍存液含1×10?~1×10?個活細胞/ml分配到一個凍存管中將細胞分配到凍存管中，標注好名稱、代數、日期等信息。
3、將要凍存的細胞置于程序降溫盒中，-80度冰箱中過夜，之后轉入液氮容器中儲存。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。
實驗原理：
公司正在出售的產品：
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植物L-抗壞血酸過氧化物酶2,細胞質(APX2)elisa分析檢測試劑盒 |
活化T細胞核因子胞漿相互作用蛋白2抗體 |
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cytosolic(APX2)ELISA kit |
甲狀腺轉錄因子-2抗體 Anti-TTF-2/FOXE1 |
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人促分裂素原活化蛋白激酶激活的蛋白激酶3(MAPKAPK3)elisa分析檢測試劑盒 |
C7orf34 |
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HumanMAPKAPK3ELISAKit |
7號染色體開放閱讀框34抗體 |
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Patched/PTCH抗體 Anti-Patched/PTCH |
NFATC2IP |
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骨橋蛋白抗體(分泌型磷蛋白1)人 Anti-OPN/BSP |
Zona pellucida glycoprotein 3 |
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電壓門控鈉通道5α抗體 Anti-Nav1.5/SCN5A |
DNAJC5B蛋白抗體 |
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卵母細胞透明帶糖蛋白3抗體 |
DNAJC5B |
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大鼠白介素2可溶性受體β鏈(sIL-2Rβ)elisa分析檢測試劑盒 |
磷酸化血管內皮生長因子受體2抗體 Anti- phospho-VEGFR2(Tyr951) |
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sIL-2Rβ ELISA kit |
神經腫瘤Nova1抗原抗體 Anti-Nova1 |
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人肌養(yǎng)蛋白(dystrophin)elisa分析檢測試劑盒 |
RAS相關蛋白Rab5B抗體 Anti-Rab5b |
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HumandystrophinELISAKit |
結構蛋白家族3抗體 Anti-TCTN3/TECT3 |
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山羊γ干擾素(IFN-γ)elisa檢測試劑盒免費代測 |
小鼠鋅結合α2-糖蛋白1(αZGP1)elisa檢測試劑盒 |
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組織游離酶連續(xù)循環(huán)熒光定量檢測試劑盒 |
NIH/3T3小鼠胚胎細胞大鼠抗心磷脂抗體IgM(ACA-IgM)elisa分析檢測試劑盒 |
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KTI12蛋白抗體 |
Bcl2樣凋亡蛋白14抗體 |
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KTI12 |
BCL2 like 14 |
實驗步驟：
1 將目的基因構建到合適的慢病毒載體上，利用293T細胞進行慢病毒包裝，獲得含目的基因的慢病毒；
2 轉染前24 h進行細胞鋪板，轉染時細胞密度控制在80%左右；
3 天加入適量病毒懸液感染細胞，并置于37 ℃，5% CO2培養(yǎng)箱中孵育；
4 24 h后用新鮮培養(yǎng)基替換含有病毒的培養(yǎng)基，并繼續(xù)培養(yǎng)；
5 在轉染3-4天后開始加藥篩選培養(yǎng)，直至顯微鏡下觀察熒光細胞比例為100%，獲得穩(wěn)轉細胞系。