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細(xì)胞接收后的處理：
1）收到細(xì)胞后，75%酒精瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染，請拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。
2）請?jiān)?或5X顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài)，同時(shí)給剛收到的細(xì)胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為售后時(shí)收到時(shí)細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。
3）貼壁細(xì)胞：細(xì)胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h，顯微鏡下觀察細(xì)胞的生長和貼壁情況，有些貼壁細(xì)胞在快遞運(yùn)送過程中會(huì)因振動(dòng)脫落和脫落后成團(tuán)的情況。若鏡下觀察細(xì)胞的生長密度若在60%以下，可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基（若有未貼壁的細(xì)胞需要離心回收，重懸打入到原培養(yǎng)瓶中）,加入新配制的完全培養(yǎng)基6-8mL，放到細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細(xì)胞生長密度達(dá)70%-80%以上，可以對(duì)細(xì)胞進(jìn)行傳代處理。傳代過程中，若因運(yùn)輸振動(dòng)脫落的細(xì)胞需要離心回收。
4）備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代。
英文簡稱
規(guī)格
貨號(hào)
SK-MEL-1:SKMEL1
1×106
P-X954
產(chǎn)品詳情：
生長特性 懸浮細(xì)胞
細(xì)胞形態(tài) 球形
生長培養(yǎng)基 MEM（含NEAA）＋10% FBS＋1% P/S
凍存條件
凍存液：55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO
溫度：液氮
培養(yǎng)條件
氣相：空氣，95%；CO2，5%
溫度：37℃
推薦傳代比例 3×10^5-5×10^5cells/mL
推薦換液頻率 2~3次/周
注意事項(xiàng) 該細(xì)胞為懸浮細(xì)胞，請注意離心收集細(xì)胞懸液；請勿直接倒掉細(xì)胞培養(yǎng)液。
背景描述 SK-MEL-1細(xì)胞由Oettgen·F及其同事從一名29歲的患有廣泛、快速進(jìn)展性惡性黑色su瘤的白人男性患者的胸導(dǎo)管中分離建立的。SK-MEL-1細(xì)胞可產(chǎn)生黑色su，電鏡檢測發(fā)現(xiàn)SK-MEL-1細(xì)胞中色su顆粒與自身合成和吞噬作用相關(guān)。在63%的惡性黑色su瘤患者和10%其他患者體內(nèi)發(fā)現(xiàn)了針對(duì)SK-MEL-1細(xì)胞的抗體。
年齡（性別） 男；29歲
組織來源 惡性黑色su瘤；皮膚；源自轉(zhuǎn)移部位：系統(tǒng)
細(xì)胞類型 腫瘤細(xì)胞
腫瘤類型 黑色su瘤細(xì)胞
生物等級(jí) 1
倍增時(shí)間 ~100 hours
致瘤性 Yes, in nude mice; forms pigmented malignant melanomas; also forms tumors in the cheek pouch of cortisone treated hamsters.
抗原表達(dá)情況 Blood Type A; Rh+
保藏機(jī)構(gòu) ATCC; HTB-67 DSMZ; ACC-303
干冰運(yùn)輸及復(fù)蘇好存活細(xì)胞
（1）1mL凍存管包裝干冰運(yùn)輸，收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。（2）T25瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨，收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作。
1）準(zhǔn)備DMEM培養(yǎng)基；胎牛血清，10%；雙抗，1%。
2）培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。
二．細(xì)胞處理：
1）凍存細(xì)胞的復(fù)蘇：：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8ml完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過夜
。天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況和細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。對(duì)于貼壁細(xì)胞傳代可以參考以下方法：1、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2、加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長消化時(shí)間），然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化。
3、輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的完全培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長活力，后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。
3）細(xì)胞凍存:收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時(shí)凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。下面T25瓶為例：
1、細(xì)胞凍存時(shí)按照細(xì)胞傳代的過程收集消化好的細(xì)胞到離心管中，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，來決定細(xì)胞的凍存密度。一般細(xì)胞的推薦凍存密度為1×10?~1×10?個(gè)活細(xì)胞/ml.
2、1000rpm離心3-5min，去掉上清。用配制好的細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞 ，按每1ml凍存液含1×10?~1×10?個(gè)活細(xì)胞/ml分配到一個(gè)凍存管中將細(xì)胞分配到凍存管中，標(biāo)注好名稱、代數(shù)、日期等信息。
3、將要凍存的細(xì)胞置于程序降溫盒中，-80度冰箱中過夜，之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲(chǔ)存。同時(shí)記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。
實(shí)驗(yàn)原理：
公司正在出售的產(chǎn)品：
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Ⅲ型纖維連接蛋白域蛋白1抗體 FNDC1 |
鹿內(nèi)皮型一氧化氮合成酶(eNOS)elisa分析檢測試劑盒 |
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AF680標(biāo)記的甲胎蛋白抗體 AFP, Alexa Fluor 680 conjugated |
通用型禽腦脊髓炎（Avian Encephalomyelitis；AE） |
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減數(shù)分裂阻滯蛋白1抗體 LIMKAIN B1 |
HumanPSMB1ELISAkit |
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金屬蛋白酶組織抑制因子-4抗體 TIMP-4 |
人蛋白酶體(prosome,macropain)亞基,β型,1(PSMB1)elisa分析檢測試劑盒 |
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尼氏染色試劑盒(甲基紫法)2×50ml |
eNOS ELISA Kit |
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大鼠髓過氧化物酶(MPO)elisa檢測試劑盒免費(fèi)代測 |
MUC20 |
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組織因子（TISSUE FACTOR）活性熒光定量檢測試劑盒 |
C2orf15抗體 |
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粘蛋白20抗體 |
C2orf15 |
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PE-Cy3標(biāo)記的兔抗猴IgM |
組織因子抗體 Anti-Tissue factor/CD142/F3 |
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Rabbit Anti-Monkey IgM / PE-Cy3 |
環(huán)指蛋白44抗體 Anti-RNF44 |
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血小板白細(xì)胞C激酶底物源結(jié)構(gòu)域M3抗體 |
DNA損傷關(guān)卡蛋白1抗體 Anti-NFBD1/MDC1 |
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PLEKHM3 |
CD2F-10抗體 Anti-SLAMF9 |
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人α1微球蛋白/bikunin前體(AMBP)elisa分析檢測試劑盒 |
豬Bcl-2相關(guān)X蛋白(BAX)elisa分析檢測試劑盒 |
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HumanAMBPELISAKit |
SK-MEL-1人皮膚黑色素瘤細(xì)胞BAXELISAKit |
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大鼠二胺氧化酶(DAO)elisa分析檢測試劑盒 |
山羊膽囊收縮素/縮膽囊素八肽(CCK-8)elisa分析檢測試劑盒 |
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DAO ELISA Kit |
CCK-8ELISAKit |
實(shí)驗(yàn)步驟：
1 將目的基因構(gòu)建到合適的慢病毒載體上，利用293T細(xì)胞進(jìn)行慢病毒包裝，獲得含目的基因的慢病毒；
2 轉(zhuǎn)染前24 h進(jìn)行細(xì)胞鋪板，轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞密度控制在80%左右；
3 天加入適量病毒懸液感染細(xì)胞，并置于37 ℃，5% CO2培養(yǎng)箱中孵育；
4 24 h后用新鮮培養(yǎng)基替換含有病毒的培養(yǎng)基，并繼續(xù)培養(yǎng)；
5 在轉(zhuǎn)染3-4天后開始加藥篩選培養(yǎng)，直至顯微鏡下觀察熒光細(xì)胞比例為100%，獲得穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系。