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細(xì)胞接收后的處理：
4）備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代。
英文簡(jiǎn)稱
規(guī)格
貨號(hào)
MDA-MB-468:MDAMB468
1×106
P-X847
產(chǎn)品詳情：
生長(zhǎng)特性
貼壁細(xì)胞
細(xì)胞形態(tài)
上皮細(xì)胞樣
生長(zhǎng)培養(yǎng)基 Leibovitz's L-15＋10% FBS＋1% P/S
凍存條件
凍存液：55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO
溫度：液氮
培養(yǎng)條件
氣相：空氣，100%
溫度：37℃
推薦傳代比例 1:2-1:4
推薦換液頻率 2~3次/周
注意事項(xiàng) 1、該細(xì)胞推薦使用Leibovitz's L-15培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，Leibovitz's L-15不可以通入二氧化碳，會(huì)產(chǎn)生細(xì)胞毒性； 2、如您沒有無(wú)二氧化碳的培養(yǎng)箱，可使用DMEM替代Leibovitz's L-15，使用DMEM培養(yǎng)基時(shí)即可正常通入5%二氧化碳； 3、配套專用培養(yǎng)基默認(rèn)Leibovitz's L-15配置，如需DMEM配方，請(qǐng)聯(lián)系銷售下單備注更改。 4、該細(xì)胞培養(yǎng)過程中會(huì)分泌少量黑色顆粒物，不影響細(xì)胞生長(zhǎng)，屬正?，F(xiàn)象。
背景描述 MDA-MB-468細(xì)胞是由Cailleau·R等人于1977年從一位患有轉(zhuǎn)移性乳腺癌的51歲黑人女性的胸腔積液中分離得到的。雖然供體組織的G6PD等位基因雜合，但MDA-MB-468細(xì)胞始終表現(xiàn)為G6PD A表型。p53MDA-MB-468細(xì)胞是由Cailleau·R等人于1977年從一位患有轉(zhuǎn)移性乳腺癌的51歲黑人女性的胸腔積液中分離得到的。雖然供體組織的G6PD等位基因雜合，但MDA-MB-468細(xì)胞始終表現(xiàn)為G6PD A表型。p53基因273位密碼子存在G→A突變，從而導(dǎo)致Arg→His替代。每個(gè)MDA-MB-468細(xì)胞上存在1×10^6個(gè)EGF受體。
年齡（性別）
女性，51歲
組織來(lái)源
乳腺；；腺癌
細(xì)胞類型
腫瘤細(xì)胞
腫瘤類型
乳腺癌細(xì)胞
生物等級(jí) 1
倍增時(shí)間 ~36-62小時(shí)
致瘤性 Yes, in nude mice inoculated subcutaneously with 1×10^7
cells.(Tumors developed within 21 days at 100% frequency (5/5).)
受體表達(dá)情況 epidermal growth factor (EGF); transforming growth factor alpha
(TGF alpha)
抗原表達(dá)情況 Blood Type AB; HLA Aw23, Aw30, B27, Bw35, Cw2, Cw4 (patient)
保藏機(jī)構(gòu) ATCC; HTB-132 DSMZ; ACC-738
1）收到細(xì)胞后，75%酒精瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染，請(qǐng)拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。
2）請(qǐng)?jiān)?或5X顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài)，同時(shí)給剛收到的細(xì)胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為售后時(shí)收到時(shí)細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。
3）貼壁細(xì)胞：細(xì)胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h，顯微鏡下觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)和貼壁情況，有些貼壁細(xì)胞在快遞運(yùn)送過程中會(huì)因振動(dòng)脫落和脫落后成團(tuán)的情況。若鏡下觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)密度若在60%以下，可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基（若有未貼壁的細(xì)胞需要離心回收，重懸打入到原培養(yǎng)瓶中）,加入新配制的完全培養(yǎng)基6-8mL，放到細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細(xì)胞生長(zhǎng)密度達(dá)70%-80%以上，可以對(duì)細(xì)胞進(jìn)行傳代處理。傳代過程中，若因運(yùn)輸振動(dòng)脫落的細(xì)胞需要離心回收。
干冰運(yùn)輸及復(fù)蘇好存活細(xì)胞
（1）1mL凍存管包裝干冰運(yùn)輸，收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染，請(qǐng)立即與我們聯(lián)系。（2）T25瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨，收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作。
1）準(zhǔn)備DMEM培養(yǎng)基；胎牛血清，10%；雙抗，1%。
2）培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。
二．細(xì)胞處理：
1）凍存細(xì)胞的復(fù)蘇：：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8ml完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過夜
。天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況和細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。對(duì)于貼壁細(xì)胞傳代可以參考以下方法：1、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2、加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長(zhǎng)消化時(shí)間），然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來(lái)終止消化。
3、輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的完全培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長(zhǎng)活力，后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。
3）細(xì)胞凍存:收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時(shí)凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。下面T25瓶為例：
1、細(xì)胞凍存時(shí)按照細(xì)胞傳代的過程收集消化好的細(xì)胞到離心管中，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，來(lái)決定細(xì)胞的凍存密度。一般細(xì)胞的推薦凍存密度為1×10?~1×10?個(gè)活細(xì)胞/ml.
2、1000rpm離心3-5min，去掉上清。用配制好的細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞 ，按每1ml凍存液含1×10?~1×10?個(gè)活細(xì)胞/ml分配到一個(gè)凍存管中將細(xì)胞分配到凍存管中，標(biāo)注好名稱、代數(shù)、日期等信息。
3、將要凍存的細(xì)胞置于程序降溫盒中，-80度冰箱中過夜，之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲(chǔ)存。同時(shí)記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。
實(shí)驗(yàn)原理：
公司正在出售的產(chǎn)品：
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人類缺陷病毒2型/2型艾滋病病毒gp36抗體 |
猴精氨酸酶1(ARG1)elisa分析檢測(cè)試劑盒 |
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HIV2 gp36 |
小鼠內(nèi)臟脂肪特異性絲氨酸蛋白酶抑制劑(vaspin)elisa檢測(cè)試劑盒 |
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溶血磷脂?；D(zhuǎn)移酶5抗體 |
UbELISAKit |
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AGPAT5 |
人泛素蛋白(Ub)elisa分析檢測(cè)試劑盒 |
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大鼠波形蛋白(VIM)elisa檢測(cè)試劑盒免費(fèi)代測(cè) |
ARG1 ELISA Kit |
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冰凍切片堿性磷酸酶活性染色試劑盒 |
MOCS2 |
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人白介素1β(IL-1β)elisa檢測(cè)試劑盒免費(fèi)代測(cè) |
1號(hào)染色體開放閱讀框83抗體 |
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鉬輔因子合成蛋白2抗體 |
C1orf83 |
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Cy3標(biāo)記的兔抗豬IgG H&L |
瞬時(shí)受體電位離子通道蛋白7抗體（M亞家族） Anti-TRPM7 |
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Rabbit Anti-Pig IgG H&L / Cy3 |
Ras-GTP酶激活蛋白3抗體 Anti-RASA3 |
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產(chǎn)氣莢膜梭菌(魏氏梭菌)磷脂酶C抗體 |
富含亮氨酸重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白10抗體 Anti-NLRP10 |
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phospholipasae C |
絲氨酸/蘇氨酸特定蛋白磷酸酶抗體 Anti-VHR/DUSP3 |
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人阿立新A(Orexin A)elisa分析檢測(cè)試劑盒 |
豬兒茶酚胺(CA)elisa分析檢測(cè)試劑盒 |
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HumanOrexinAELISAKit |
MDA-MB-468人乳腺癌細(xì)胞CAELISAKit |
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大鼠谷胱甘肽(GSH)elisa分析檢測(cè)試劑盒 |
豚鼠嗜酸性粒細(xì)胞陽(yáng)離子蛋白(ECP)elisa分析檢測(cè)試劑盒 |
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GSH ELISA Kit |
ECPELISAKit |
實(shí)驗(yàn)步驟：
1 將目的基因構(gòu)建到合適的慢病毒載體上，利用293T細(xì)胞進(jìn)行慢病毒包裝，獲得含目的基因的慢病毒；
2 轉(zhuǎn)染前24 h進(jìn)行細(xì)胞鋪板，轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞密度控制在80%左右；
3 天加入適量病毒懸液感染細(xì)胞，并置于37 ℃，5% CO2培養(yǎng)箱中孵育；
4 24 h后用新鮮培養(yǎng)基替換含有病毒的培養(yǎng)基，并繼續(xù)培養(yǎng)；
5 在轉(zhuǎn)染3-4天后開始加藥篩選培養(yǎng)，直至顯微鏡下觀察熒光細(xì)胞比例為100%，獲得穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系。