咨詢電話：18117197628
細胞接收后的處理：
1）收到細胞后，75%酒精瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細胞有污染，請拍照后及時聯(lián)系我們。
2）請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態(tài)，同時給剛收到的細胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為售后時收到時細胞狀態(tài)的依據(jù)。
3）貼壁細胞：細胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h，顯微鏡下觀察細胞的生長和貼壁情況，有些貼壁細胞在快遞運送過程中會因振動脫落和脫落后成團的情況。若鏡下觀察細胞的生長密度若在60%以下，可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基（若有未貼壁的細胞需要離心回收，重懸打入到原培養(yǎng)瓶中）,加入新配制的完全培養(yǎng)基6-8mL，放到細胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細胞生長密度達70%-80%以上，可以對細胞進行傳代處理。傳代過程中，若因運輸振動脫落的細胞需要離心回收。
4）備注：運輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。收到細胞后次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代。
英文簡稱
規(guī)格
貨號
LS180:LS180
1×106
P-X828
產品詳情：
生長特性 貼壁細胞
細胞形態(tài) 上皮細胞樣，有空泡
凍存條件
凍存液：55% 基礎培養(yǎng)基+40% FBS+5% DMSO
溫度：液氮
培養(yǎng)方案A（默認）
生長培養(yǎng)基:
DMEM+10% FBS+1% P/S
培養(yǎng)條件:
氣相：空氣，95%；CO2，5%, 溫度：37℃
推薦傳代比例 1:2-1:4
推薦換液頻率 2-3次/周
參考資料(來源文獻)
背景描述 LS 180 is a cell exhibiting epithelial morphology isolated from the colon of a White, 58-year-old female patient with colorectal.
年齡（性別） 女性；58歲
組織來源 結腸
細胞類型 腫瘤細胞
腫瘤類型 結腸腺癌細胞
生物等級 BSL-1
倍增時間 48-72 hours
致瘤性 Yes; Yes, in nude mice
抗原表達情況 Serologically defined colon cancer antigen 3; Homo sapiens, expressed HLA A2, B13, B50; Blood type O
基因表達情況 carcinoembryonic antigen (CEA); interleukin 10; interleukin 6; mucin
保藏機構 ATCC; CL-187
干冰運輸及復蘇好存活細胞
（1）1mL凍存管包裝干冰運輸，收到后-80度冰箱保存過夜后轉入液氮或直接復蘇，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。（2）T25瓶復蘇的存活細胞常溫發(fā)貨，收到后按照細胞接收后的處理方法操作。
1）準備DMEM培養(yǎng)基；胎牛血清，10%；雙抗，1%。
2）培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。
二．細胞處理：
1）凍存細胞的復蘇：：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，完全培養(yǎng)基重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8ml完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過夜
。天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。對于貼壁細胞傳代可以參考以下方法：1、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2、加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細胞可以適當延長消化時間），然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化。
3、輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的完全培養(yǎng)基以保持細胞的生長活力，后續(xù)傳代根據(jù)實際情況按1:2~1:5的比例進行。
3）細胞凍存:收到細胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細胞種子以備后續(xù)實驗使用。下面T25瓶為例：
1、細胞凍存時按照細胞傳代的過程收集消化好的細胞到離心管中，可使用血球計數(shù)板計數(shù)，來決定細胞的凍存密度。一般細胞的推薦凍存密度為1×10?~1×10?個活細胞/ml.
2、1000rpm離心3-5min，去掉上清。用配制好的細胞凍存液重懸細胞 ，按每1ml凍存液含1×10?~1×10?個活細胞/ml分配到一個凍存管中將細胞分配到凍存管中，標注好名稱、代數(shù)、日期等信息。
3、將要凍存的細胞置于程序降溫盒中，-80度冰箱中過夜，之后轉入液氮容器中儲存。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。
實驗原理：
公司正在出售的產品：
|
腫瘤壞死因子誘導蛋白8樣蛋白1/TNFα-IP 8L1抗體 TNFAIP8L1 |
磷酸化蛋白激酶PKMYT1(Ser83)抗體 Phospho-PKMYT1 (Ser83) |
|
軸突導向受體蛋白2抗體 Robo2 |
線粒體轉錄因子1抗體 MtTF1/TFAM |
|
睪丸特異性蛋白57抗體 CEP57 |
Cy5標記的網格蛋白重鏈抗體 Clathrin heavy chain, Cy5 conjugated |
|
骨形態(tài)發(fā)生蛋白7抗體 BMP7 |
CD4抗體 CD4 |
|
心臟蛋白磷酸酶1結合蛋白/環(huán)指蛋白158抗體 RNF158 |
磷酸化酪氨酸蛋白激酶BTK抗體 Phospho-BTK (Tyr223) |
|
白介素-23受體抗體 IL-23R |
神經細胞囊泡循環(huán)蛋白1抗體 Synaptogyrin 1 |
|
半椎蛋白2抗體 HMCN2 |
MUTED蛋白抗體 MUTED |
|
蛇毒蛋白抗體（中華眼鏡蛇） Snake poison Protein |
NLE1蛋白抗體 NLE1 |
|
TRIzol總RNA提取試劑 100ml |
珠蛋白轉錄因子1抗體 GATA1 |
|
小鼠催乳素抑制(PIH)elisa檢測試劑盒免費代測 |
轉錄因子HEY2蛋白抗體 HEY2 |
|
脯氨酸（PRO）含量測試盒 |
瓜氨酸環(huán)肽抗體 CCP |
|
冰凍切片組織化學HRP酶聯(lián)DAB直接檢測試劑盒（含HRP一抗） |
核因子κB抑制蛋白α抗體 IKB alpha |
|
小鼠雄受體(AR)elisa檢測試劑盒 |
組織二脂酰甘油（DAG）含量酶連續(xù)循環(huán)反應比色法 |
|
大鼠抗胰蛋白酶(AT)elisa檢測試劑盒免費代測 |
LS180人結直腸癌細胞山羊白介素1β(IL-1β)elisa檢測試劑盒 |
|
人Apelin elisa檢測試劑盒 |
小鼠抗內膜抗體（EMAb）elisa檢測試劑盒 |
|
/酵母酶（glutaminase）活性比色法（405）定量檢測試劑盒 |
大鼠二價金屬離子轉運體（DMT1）elisa檢測試劑盒 |
實驗步驟：
1 將目的基因構建到合適的慢病毒載體上，利用293T細胞進行慢病毒包裝，獲得含目的基因的慢病毒；
2 轉染前24 h進行細胞鋪板，轉染時細胞密度控制在80%左右；
3 天加入適量病毒懸液感染細胞，并置于37 ℃，5% CO2培養(yǎng)箱中孵育；
4 24 h后用新鮮培養(yǎng)基替換含有病毒的培養(yǎng)基，并繼續(xù)培養(yǎng)；
5 在轉染3-4天后開始加藥篩選培養(yǎng)，直至顯微鏡下觀察熒光細胞比例為100%，獲得穩(wěn)轉細胞系。