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英文簡(jiǎn)稱
規(guī)格
貨號(hào)
hccc-9810:hccc9810
1×106
P-X732
產(chǎn)品詳情：
生長(zhǎng)特性 貼壁細(xì)胞
細(xì)胞形態(tài) 上皮細(xì)胞樣
生長(zhǎng)培養(yǎng)基 RPMI-1640＋10% FBS＋1% P/S
凍存條件
凍存液：55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO
溫度：液氮
培養(yǎng)條件
氣相：空氣，95%；CO2，5%
溫度：37℃
推薦傳代比例 1:2-1:4
推薦換液頻率 2~3次/周
背景描述 HCCC-9810細(xì)胞源自一位女性肝膽管細(xì)胞癌患者，呈上皮細(xì)胞樣。HCCC-9810細(xì)胞染色體模式數(shù)為71，但其染色體數(shù)目可以在22-117的范圍內(nèi)變動(dòng)。HCCC-9810細(xì)胞倍增時(shí)間為20.4小時(shí)；細(xì)胞內(nèi)AFP、CEA和CA19-9的分泌水平低，HCCC-9810細(xì)胞在裸鼠中的成瘤率為20%。
年齡（性別） 女
組織來(lái)源 肝膽管細(xì)胞癌
細(xì)胞類(lèi)型 腫瘤細(xì)胞
腫瘤類(lèi)型 肝膽癌細(xì)胞
致瘤性 Yes, in nude mice.
干冰運(yùn)輸及復(fù)蘇好存活細(xì)胞
（1）1mL凍存管包裝干冰運(yùn)輸，收到后-80度冰箱保存過(guò)夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染，請(qǐng)立即與我們聯(lián)系。（2）T25瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨，收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作。
1）收到細(xì)胞后，75%酒精瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染，請(qǐng)拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。
2）請(qǐng)?jiān)?或5X顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài)，同時(shí)給剛收到的細(xì)胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為售后時(shí)收到時(shí)細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。
3）貼壁細(xì)胞：細(xì)胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h，顯微鏡下觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)和貼壁情況，有些貼壁細(xì)胞在快遞運(yùn)送過(guò)程中會(huì)因振動(dòng)脫落和脫落后成團(tuán)的情況。若鏡下觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)密度若在60%以下，可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基（若有未貼壁的細(xì)胞需要離心回收，重懸打入到原培養(yǎng)瓶中）,加入新配制的完全培養(yǎng)基6-8mL，放到細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細(xì)胞生長(zhǎng)密度達(dá)70%-80%以上，可以對(duì)細(xì)胞進(jìn)行傳代處理。傳代過(guò)程中，若因運(yùn)輸振動(dòng)脫落的細(xì)胞需要離心回收。
4）備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說(shuō)明書(shū)細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代。
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備DMEM培養(yǎng)基；胎牛血清，10%；雙抗，1%。
2）培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。
二．細(xì)胞處理：
1）凍存細(xì)胞的復(fù)蘇：：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8ml完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過(guò)夜
。天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況和細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。對(duì)于貼壁細(xì)胞傳代可以參考以下方法：1、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2、加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長(zhǎng)消化時(shí)間），然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來(lái)終止消化。
3、輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說(shuō)明書(shū)要求配置的新的完全培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長(zhǎng)活力，后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。
3）細(xì)胞凍存:收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時(shí)凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。下面T25瓶為例：
1、細(xì)胞凍存時(shí)按照細(xì)胞傳代的過(guò)程收集消化好的細(xì)胞到離心管中，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，來(lái)決定細(xì)胞的凍存密度。一般細(xì)胞的推薦凍存密度為1×10?~1×10?個(gè)活細(xì)胞/ml.
2、1000rpm離心3-5min，去掉上清。用配制好的細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞 ，按每1ml凍存液含1×10?~1×10?個(gè)活細(xì)胞/ml分配到一個(gè)凍存管中將細(xì)胞分配到凍存管中，標(biāo)注好名稱、代數(shù)、日期等信息。
3、將要凍存的細(xì)胞置于程序降溫盒中，-80度冰箱中過(guò)夜，之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲(chǔ)存。同時(shí)記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。
實(shí)驗(yàn)原理：
實(shí)驗(yàn)步驟：
1 將目的基因構(gòu)建到合適的慢病毒載體上，利用293T細(xì)胞進(jìn)行慢病毒包裝，獲得含目的基因的慢病毒；
2 轉(zhuǎn)染前24 h進(jìn)行細(xì)胞鋪板，轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞密度控制在80%左右；
3 天加入適量病毒懸液感染細(xì)胞，并置于37 ℃，5% CO2培養(yǎng)箱中孵育；
4 24 h后用新鮮培養(yǎng)基替換含有病毒的培養(yǎng)基，并繼續(xù)培養(yǎng)；
5 在轉(zhuǎn)染3-4天后開(kāi)始加藥篩選培養(yǎng)，直至顯微鏡下觀察熒光細(xì)胞比例為100%，獲得穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系。
公司正在出售的產(chǎn)品：
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中心粒周蛋白抗體 PCNT |
核糖體S6蛋白激酶β2抗體 p70 S6 Kinase Beta |
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腫瘤抑制基因P53蛋白抗體 human P53 |
神經(jīng)前體細(xì)胞表達(dá)蛋白1抗體 NEDD1 |
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干擾素α8抗體 Interferon alpha 8 |
轉(zhuǎn)錄因子源蛋白Nkx6.3抗體 Nkx6.3 |
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谷氨酸草酰乙酸轉(zhuǎn)氨酶1樣蛋白1抗體 GOT1L1 |
轉(zhuǎn)錄輔助因子退變樣蛋白1抗體 VGLL1 |
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神經(jīng)元突觸膜胞外分泌調(diào)節(jié)蛋白3抗體 RIMS3 |
亨丁頓舞蹈癥相互作用蛋白12/HIP1R抗體 HIP12 |
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NARFL蛋白抗體 NARFL |
磷酸化糖皮質(zhì)受體DNA結(jié)合因子1抗體 phospho-GRLF1 (Tyr1087) |
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NUDT5蛋白抗體 NUDT5 |
DALRD3蛋白抗體 DALRD3 |
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磷酸化磷酸化絲氨酸/蘇氨酸激酶p90RSK蛋白抗體 phospho-RPS6KA1 (Thr348) |
DNA損傷關(guān)卡蛋白1抗體 MDC1 |
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表兒茶素含量測(cè)試盒 |
鋅指蛋白10抗體 ZNF10 |
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大鼠谷胱甘肽(GSH)elisa檢測(cè)試劑盒 |
鋅指蛋白3抗體 ZFP3 |
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組織基質(zhì)金屬（MMP-8）活性比色法定量檢測(cè)試劑盒 |
胞漿區(qū)相關(guān)蛋白GIPC2抗體 GIPC-2 |
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人附睪蛋白4(HE4)elisa檢測(cè)試劑盒免費(fèi)代測(cè) |
叉頭蛋白I1抗體 FOXI1 |
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大鼠胰島素原(PI)elisa檢測(cè)試劑盒 |
小鼠Toll樣受體7(TLR7)elisa分析檢測(cè)試劑盒 |
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CASPASE-6蛋白表達(dá)西方雜交分析試劑盒 |
hccc-9810人膽管細(xì)胞型肝癌細(xì)胞NADH氧化酶（NOX）測(cè)試盒 |
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高效液相色譜法（HPLC）定量檢測(cè)試劑盒 |
大鼠檸檬酸合酶(CS)elisa檢測(cè)試劑盒 |
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兔白介素1βelisa檢測(cè)試劑盒 |
細(xì)胞衰老特異性脂褐素靛酚原位染色試劑盒 |