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細(xì)胞接收后的處理：
1）收到細(xì)胞后，75%酒精瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染，請拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。
2）請?jiān)?或5X顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài)，同時(shí)給剛收到的細(xì)胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為售后時(shí)收到時(shí)細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。
3）貼壁細(xì)胞：細(xì)胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h，顯微鏡下觀察細(xì)胞的生長和貼壁情況，有些貼壁細(xì)胞在快遞運(yùn)送過程中會因振動脫落和脫落后成團(tuán)的情況。若鏡下觀察細(xì)胞的生長密度若在60%以下，可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基（若有未貼壁的細(xì)胞需要離心回收，重懸打入到原培養(yǎng)瓶中）,加入新配制的完全培養(yǎng)基6-8mL，放到細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細(xì)胞生長密度達(dá)70%-80%以上，可以對細(xì)胞進(jìn)行傳代處理。傳代過程中，若因運(yùn)輸振動脫落的細(xì)胞需要離心回收。
4）備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代。
英文簡稱
規(guī)格
貨號
COLO320 DM :COLO320 DM
1×106
P-X692
產(chǎn)品詳情：
細(xì)胞別稱： COLO-320DM; COLO_320DM; COLO-320-DM; COLO320/DM; COLO320-DM; COLO320DM; Colo320DM; COLO320 DM; COLO 320 DM；人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞
種屬來源： 人
年齡性別： 女；55歲
組織來源： 器官：結(jié)腸；腫瘤分期：Dukes氏Ｃ型；：結(jié)直腸腺癌
生長特性： 半貼壁半懸浮生長
細(xì)胞形態(tài)： 圓形的并能折光的
背景簡介： COLO 320DM細(xì)胞可產(chǎn)生5-羥色胺、去甲腎上腺素、腎上腺素、ACTH和甲狀旁腺素。COLO 320DM細(xì)胞角蛋白、波形蛋白弱陽性。
生物等級： 1
細(xì)胞規(guī)格： 1×106cells/T25培養(yǎng)瓶或者1mL凍存管包裝
支原體檢測： 無
基因表達(dá)情況 serotonin; norepinephrine; epinephrine; adrenocorticotropic hormone (ACTH); parathyroid hormone
保藏機(jī)構(gòu) ATCC; CCL-220 BCRC; 60108 ECACC; 87061205；中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所細(xì)胞資源中心
培養(yǎng)基： RPMI-1640+10% FBS+1%PS
培養(yǎng)條件： 氣相：95%空氣+5%二氧化碳；溫度：37℃
凍存條件： 無血清凍存液，液氮儲存
STR鑒定位點(diǎn) Amelogenin：X；CSF1PO：11；D13S317：11；D16S539：11，12；D18S51：15；D19S433：16.2；D21S11：33.2；D2S1338：18，25；D3S1358：17；D5S818：12；D7S820：9，12；D8S1179：13；FGA：20；TH01：9；TPOX：8，9；vWA：15，18；
干冰運(yùn)輸及復(fù)蘇好存活細(xì)胞
（1）1mL凍存管包裝干冰運(yùn)輸，收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。（2）T25瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨，收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作。
1）準(zhǔn)備DMEM培養(yǎng)基；胎牛血清，10%；雙抗，1%。
2）培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。
二．細(xì)胞處理：
1）凍存細(xì)胞的復(fù)蘇：：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8ml完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過夜
。天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況和細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。對于貼壁細(xì)胞傳代可以參考以下方法：1、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2、加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長消化時(shí)間），然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化。
3、輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的完全培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長活力，后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。
3）細(xì)胞凍存:收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時(shí)凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。下面T25瓶為例：
1、細(xì)胞凍存時(shí)按照細(xì)胞傳代的過程收集消化好的細(xì)胞到離心管中，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，來決定細(xì)胞的凍存密度。一般細(xì)胞的推薦凍存密度為1×10?~1×10?個(gè)活細(xì)胞/ml.
2、1000rpm離心3-5min，去掉上清。用配制好的細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞 ，按每1ml凍存液含1×10?~1×10?個(gè)活細(xì)胞/ml分配到一個(gè)凍存管中將細(xì)胞分配到凍存管中，標(biāo)注好名稱、代數(shù)、日期等信息。
3、將要凍存的細(xì)胞置于程序降溫盒中，-80度冰箱中過夜，之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲存。同時(shí)記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。
實(shí)驗(yàn)原理：
公司正在出售的產(chǎn)品：
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IWS1蛋白抗體 |
補(bǔ)體C3b抗體 Complement C3 beta chain |
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IWS1 |
磷酸化肌球蛋白輕鏈多肽4抗體 phospho-MYL12B (Ser20) |
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載脂蛋白A1結(jié)合蛋白抗體抗體 |
鋅指蛋白257抗體 ZNF257 |
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APOA1BP/AI-BP |
小鼠抗人CD273 (B7-DC, PD-L2)單克隆抗體 human CD273 (B7-DC, PD-L2) |
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磷酸化腎上腺素能受體β2抗體 phospho-ADRB2 (Ser346) |
成纖維細(xì)胞生長因子受體2重組兔單克隆抗體 FGFR2 |
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CRISPR/Cas9單克隆抗體 Cas9 |
環(huán)磷酸鳥苷抗體 cGMP |
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DNAJC18蛋白抗體 DNAJC18 |
轉(zhuǎn)錄因子AP2α+β抗體 AP2 alpha + beta |
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核因子1B抗體 NFIB |
轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白SEC62抗體 SEC62 |
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大鼠不對稱二甲基精氨酸(ADMA)elisa分析檢測試劑盒 |
神經(jīng)突觸相關(guān)蛋白SLITRK4抗體 SLITRK4 |
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小鼠抗心磷脂抗體IgG(ACA-IgG)elisa檢測試劑盒免費(fèi)代測 |
生物素標(biāo)記的單體櫻桃紅熒光蛋白標(biāo)簽抗體 mCherry, Biotin conjugated |
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植物類黃酮測試盒 |
NFKB激活蛋白1抗體 MAP3K7IP3 |
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/酵母胱硫醚-β-裂解酶（cystathionine β-lyase；CBL）活性比色法定量檢測試劑盒 |
PECI蛋白抗體 PECI |
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豬S100B蛋白(S-100B)elisa檢測試劑盒 |
組織砷元素比色法定量檢測試劑盒 |
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大鼠纖溶酶原激活物抑制因子1(PAI1)elisa檢測試劑盒 |
COLO320 DM 人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞小鼠B-細(xì)胞趨化因子1(BLC1)elisa檢測試劑盒 |
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人脆性組氨酸三聯(lián)體(FHIT)elisa分析檢測試劑盒 |
小鼠心肌肌鈣蛋白I(TNNI3)elisa檢測試劑盒 |
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細(xì)胞游離酶連續(xù)循環(huán)比色法定量檢測試劑盒 |
大鼠抗人生長抗體(IgG)elisa分析檢測試劑盒 |
實(shí)驗(yàn)步驟：
1 將目的基因構(gòu)建到合適的慢病毒載體上，利用293T細(xì)胞進(jìn)行慢病毒包裝，獲得含目的基因的慢病毒；
2 轉(zhuǎn)染前24 h進(jìn)行細(xì)胞鋪板，轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞密度控制在80%左右；
3 天加入適量病毒懸液感染細(xì)胞，并置于37 ℃，5% CO2培養(yǎng)箱中孵育；
4 24 h后用新鮮培養(yǎng)基替換含有病毒的培養(yǎng)基，并繼續(xù)培養(yǎng)；
5 在轉(zhuǎn)染3-4天后開始加藥篩選培養(yǎng)，直至顯微鏡下觀察熒光細(xì)胞比例為100%，獲得穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系。