注意事項：

①加入試劑的順序應一致，以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。

②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。

③按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。

④底物A應揮發(fā)，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。

⑤洗滌酶標板時應充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。

⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器 。

⑦實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。

⑧試劑應按標簽說明書儲存，使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄，不可保存。

⑨不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。

需自備的儀器和用品：

高效液相色譜儀、示差折光檢測器、低速離心機、溶劑抽濾裝置、超聲波清洗器、針頭式過濾器（水系，50個，0.22μm）、濾膜（水系1個，0.45μm）、

鈣柱（Carbomix Ca-NP10，7.8 ×300 mm）、可調(diào)式移液器、樣品瓶（50個，2mL）、超純水。

優(yōu)點如下：

1、快速簡便：操作時間短，48-50T，可測40例樣本左右，96-100T,可測80例樣本左右；

2、取樣量微：常規(guī)操作取樣量50l， 酶標儀操作僅需5l即可檢測，部分試劑盒取樣多少請；

3、穩(wěn)定性好：試劑盒2～8℃存放3個月有效；

4、再現(xiàn)性好：20倍稀釋線性仍然良好；

5、回收試驗： X =99%；

6、受外界影響因素?。焊蓴_因素少，重復性強；

7、測試面廣：可測動物血清(漿)、組織、各種體液、灌流液、各種培養(yǎng)細胞以及細胞培養(yǎng)上清液等，部分試劑盒適用于檢測植物。

測定步驟：

1.加樣

1. 除包被外都需45度加樣

2.加樣體積要準確

3.管底加樣，不能加在管壁上

4.加樣時不能產(chǎn)生氣泡

2.溫浴

1.加標本后和加結(jié)合物后，應立即放入按規(guī)定的反應溫 度的水浴箱。

2.各ELISA板不應疊在一起。

3.為避免蒸發(fā)，板上應加蓋，或?qū)迤椒旁诘撞繅|有濕 紗布的金屬濕盒中。

4.加入底物后，反應的時間和溫度通常不做嚴格要求。 如室溫高于20℃，ELISA板可避光放在實驗臺上，以便 不時觀察，待對照管顯色適當時，即可終止酶反應。

3.洗滌

1.洗滌在ELISA過程中不是反應步驟，但卻 是決定實驗成敗的關(guān)鍵。

2.目的是洗去反應液中沒有與固相抗原或 抗體結(jié)合的物質(zhì)以及在反應過程中非特 異性吸附于固相載體的干擾物質(zhì)。

4.讀板

1.陰性對照顏色極淺，在定性測定中一般 可采用目視比色。

2.如用酶標儀測定結(jié)果，準確性決定于 ELISA板底的平整與透明度、酶標儀的質(zhì) 量和軟件的算法。

優(yōu)點如下：

1、快速簡便：全程約50分鐘，可測100例左右樣本。

2、取樣量微：本法取手指或耳垂等末梢血20ul～50ul即可測紅細胞中的SOD，只需2ml靜脈血可測白細胞中的SOD及血小板中SOD，只需50mg左右組織就可測組織勻漿、胞漿中的SOD，0.2g組織可測線粒體及微粒體中的SOD。

3、靈敏度高：IC50=0.05g/ml，是鄰苯三酚法的18倍。

4、穩(wěn)定性好：試劑盒2～8℃存放6個月有效。

5、再現(xiàn)性好：變異系數(shù)CV=1.7%。

6、回收試驗： X =103.3%。

7、受外界影響因素?。焊蓴_因素少，重復性強。

8、測試面廣：可測動物血液、組織、各種體液、灌流液等、各種培養(yǎng)細胞、植物組織、各種水產(chǎn)以及化妝品、保健品等，效果均佳。

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