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抗體的種類:
抗體是在抗原刺激下產(chǎn)生的,體液性抗體由B淋細(xì)胞系產(chǎn)生。根據(jù)其化學(xué)結(jié)構(gòu)和抗原的不同可分為IgG、IgM、IgA、 IgE和IgD5種類型.目前對(duì)疫球蛋白G、A、M、E了解較多,對(duì)D的功能了解較少。
(1) IgG:是血清中濃度大的一類球蛋白,約占疫球蛋白含量的70~80%,50%分布于血漿。機(jī)體受到抗原初次刺激后,其產(chǎn)生時(shí)間僅次于IgM。在抗體介導(dǎo)的抗感染免中起主要作用。IgG是球蛋白單體,分子量16萬~18萬,可以通過兔的胎盤,但不能通過豬和牛的胎盤。在體內(nèi)可以有效地抵抗**、病毒等微生物侵襲。在體外的血清學(xué)反應(yīng)中,參與沉淀反應(yīng)、凝集反應(yīng)、補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng)和中和反應(yīng)。
(2) IgM:由5個(gè)球蛋白單位組成的五聚體,在血清中的含量僅次于IgG,分子量90萬,是體內(nèi)大的球蛋白??乖醮未碳C(jī)體后,IgM出現(xiàn)早,在血清中的含量僅次于IgG,主要分布在血管內(nèi),可以通過激活補(bǔ)體發(fā)揮溶菌、溶細(xì)胞及中和病毒的作用。因其是五聚體,免作用很強(qiáng),是IgG的100倍,但由于含量僅為IgG的1/10,且持續(xù)時(shí)間短,所以在抗感染疫中不能起主要作用。在體外的血清學(xué)反應(yīng)中,參與凝集反應(yīng)和補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng)。
(3) IgA:有單體和雙體兩種形式。單體存在于血清中,分子量約為17萬,亦稱為血清型IgA,有**和抗病毒作用。雙體主要存在于外分泌液中,如唾液、淚液、初乳、氣管分泌液,以初乳中的含量高。雙體IgA亦稱為分泌型IgA,由存在于粘膜和組織上的漿細(xì)胞產(chǎn)生,分子量40萬,含量較單體高6~8倍,是粘膜的重要防御因素,可以阻止**或病毒吸附于粘膜表面。
(4) IgE:是一種特殊的糖蛋白,為單位體結(jié)構(gòu),分子量19萬,由消化道、呼吸道粘膜固有層及局部結(jié)中的漿細(xì)胞所形成,在血清中含量甚微,是一種致敏抗體,容易吸附在**表面,當(dāng)與相應(yīng)抗原結(jié)合所引起過敏反應(yīng)。在機(jī)體抵抗**和病毒的感染中幾乎無作用。
別 名 cytosolic; BCAT; BCAT(c); Bcat1; BCAT1_HUMAN; BCT1; Branched chain amino acid aminotransferase, cytosolic; Branched-chain-amino-acid aminotransferase; ECA39; MECA39; PNAS 121; Protein ECA39.
英文名稱 Anti-BCAT1
中文名稱 胞漿支鏈氨基酸酸轉(zhuǎn)氨酶抗體
濃 度 1mg/1ml
規(guī) 格 0.1ml/100μg 0.2ml/200μg
抗體來源 Rabbit
克隆類型 polyclonal
交叉反應(yīng) Human, Mouse, Rat, Chicken, Dog, Pig, Cow, Horse, Sheep
產(chǎn)品類型 一抗
研究領(lǐng)域 細(xì)胞生物 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)
蛋白分子量 predicted molecular weight: 43kDa
性 狀 Lyophilized or Liquid
免 疫 原 KLH conjugated synthetic peptide derived from human BCAT1
產(chǎn)品應(yīng)用 WB=1:100-500 ELISA=1:500-1000 IP=1:20-100 IHC-P=1:100-500 IHC-F=1:100-500 IF=1:100-500
亞 型 IgG
本公司產(chǎn)品僅用于科研實(shí)驗(yàn)。
抗體的熒光標(biāo)記法:
(一)基本原理
賴氨酸殘基的游離e-氨基可與FITC(其激發(fā)波長為492nm,發(fā)射光波長為525nm)共價(jià)結(jié)合。與FITC結(jié)合的抗體可用為特異性的探針,以測定細(xì)胞相應(yīng)抗原的存在。FITC具有很高的量子產(chǎn)量(發(fā)射光與吸收光的比值,0.85)形成的偶聯(lián)物的穩(wěn)定性很好。
(二)儀器和試劑
1.待偶聯(lián)抗體;
2.碳酸氫鈉緩沖液;
3.疊氮鈉;
4.庵氰酸熒光素;
5.電磁攪拌器。
抗體反應(yīng)特點(diǎn):
1.高度特異性,特異性是抗原抗體反應(yīng)的主要特征,特定抗原決定簇只與特定抗體結(jié)合;
2.可逆性:抗原與抗體結(jié)合形成抗原抗體復(fù)合物的過程是一種動(dòng)態(tài)平衡, 其反應(yīng)式為:Ag+AbAg·Ab;
3.適當(dāng)濃度和比例;
4.敏感性:在測定血清中某一物質(zhì)的含量時(shí),化學(xué)比色法的敏感度為mg/ml水平,酶反應(yīng)測定法的敏感度約為5~10μg/ml,定中凝膠擴(kuò)散法的敏感度與酶反應(yīng)法相仿。
抗體反應(yīng)的因素:
1.電解質(zhì) :抗原抗體特異結(jié)合后,膠體粒便可發(fā)生脫水作用,此時(shí)易受電解質(zhì)影響,如有適當(dāng)濃度的電解質(zhì)存在就會(huì)使它們失去部分負(fù)電荷而相互凝聚,于是出現(xiàn)明顯的凝集或沉淀現(xiàn)象。
2.酸堿度:合適的pH為6-8。
3.溫度:37℃通常是抗原體反應(yīng)溫度。
實(shí)驗(yàn)步驟:
1、石蠟切片,常規(guī)脫蠟至水
2、蒸餾水沖洗,pbs 浸泡5 分鐘(如需采用抗原修復(fù),在此步驟后進(jìn)行)。
3、3%雙氧水去離子水(無色液體)孵育15-20 分鐘,以消除內(nèi)源性過氧物酶活性。
4、滴加試劑A(藍(lán)色液體)室溫孵育15-20 分鐘,傾去,勿洗。
5、滴加適當(dāng)比例稀釋的一抗,37℃孵育2-3 小時(shí)或4℃過夜。
6、PBS 沖洗,3 分鐘3 次。
7、滴加試劑B(黃色液體),室溫或37℃孵育15-20 分鐘。
8、PBS 沖洗,3 分鐘3 次。
9、滴加試劑C(橙色液體),室溫或37℃孵育15-20 分鐘。
10、PBS 沖洗,3 分鐘3 次。
11、顯色劑顯色(DAB 或AEC)
12、自來水充分沖洗。
13、如果需要,可進(jìn)行復(fù)染,脫水,透明。
14、選擇適當(dāng)?shù)姆馄瑒┓馄?/span>
抗體分子標(biāo)記技術(shù):
(一)原理
當(dāng)應(yīng)用化學(xué)氧化法時(shí)(NaI)遇強(qiáng)氧化劑,離子被氧化為分子,所**的自由分子可與某些基團(tuán)進(jìn)行鹵化反應(yīng)。蛋白質(zhì)分子可進(jìn)行鹵化反應(yīng)的基團(tuán)主要為酪氨酸殘基,某些組氨酸殘基也可能進(jìn)行化。在應(yīng)用胺T( Chloramine T)法的實(shí)驗(yàn)中,所用的氧化劑(1,3,4,6- tetrachloro-3a,6adipheny l-glucoluril)強(qiáng)揮發(fā)性的有機(jī)溶劑中。該溶劑加入試管后,先讓其揮發(fā)(即讓氧化劑將試管包被),然后把Na125I和蛋白質(zhì)液加入包被好的試管中,反應(yīng)完成即將混合液移入他管終止反應(yīng)。
(二)準(zhǔn)備
1.試劑
經(jīng)親和層析純化的多克隆抗體或單克隆抗體;0.5mol/L磷酸鈉緩沖液,pH7.5;無載體的Na125I3.7GBq/ml(100mCi/ml)的NaOH液;100g/L三醋酸;70%乙醇;新鮮制備的含2mg/m1絡(luò)胺T的0.5mol/L磷酸鈉緩沖液(pH7.5);胺T反應(yīng)終止緩沖液;
2.儀器
凝膠過濾柱;¥-記數(shù)器;玻璃纖維濾。
(三)操作要點(diǎn)
1.用胺T法進(jìn)行化,也可在大約pH7.0的緩沖液中進(jìn)行;
2.如果氧化反應(yīng)損傷蛋白質(zhì),可將抗體與異硫氰酸熒光素(FITC)偶聯(lián))胺T量減少到0.02mg/m,并將偏重亞硫酸液的濃度降到0.024mg/ml;
3. Iodogen-包被的試管可在干燥器中,于室溫下保存多年;
4.1251標(biāo)記的抗體,在制備后六周內(nèi)均可使用(1251的半衰期為59.6天);
5.要注意保證所用的Na1251是新鮮的,陳舊制劑的比活性低;
6.酪氨酸的碘化偶爾會(huì)對(duì)抗原的抗體結(jié)合位點(diǎn)有干擾,因此降低其結(jié)合能力,但這種情況很少見。
成纖維生長因子19(FGF19)檢測試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗(yàn)法) ELISAKitforFibroblastGrowthFactor19(FGF19) 規(guī)格:48T/96T 進(jìn)口、國產(chǎn)
抗神經(jīng)元核抗體1型(ANNA1)檢測試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗(yàn)法) ELISAKitforAnti-NeuronalNuclearAntibody1(ANNA1) 規(guī)格:48T/96T 進(jìn)口、國產(chǎn)
功能關(guān)聯(lián)抗原2(LFA2)檢測試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗(yàn)法) ELISAKitforLymphocyteFunctionAssociatedAntigen2(LFA2) 規(guī)格:48T/96T 進(jìn)口、國產(chǎn)
107kDa肌醇多聚磷酸-4-磷酸酶Ⅰ型(INPP4A)檢測試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗(yàn)法) ELISAKitforInositolPolyphosphate-4-PhosphataseTypeI107kDa(INPP4A) 規(guī)格:48T/96T 進(jìn)口、國產(chǎn)
白介素-16抗原 IL-16/LCF(interleukin-16)(Lymphocyte Chemotactic Factor) 規(guī)格: 0.5mg 進(jìn)口/國產(chǎn)
管內(nèi)皮透明質(zhì)酸受體抗原 LYVE-1(lymphalic vessel endotheilial hyaluronan receptor 1) 規(guī)格: 0.5mg 進(jìn)口/國產(chǎn)
NK受體/自然殺傷活化性受體 NKG2D(natural killer cell group 2D) 規(guī)格: 0.5mg 進(jìn)口/國產(chǎn)
胃蛋白酶原C蛋白抗原 Pepsinogen C peptide 規(guī)格: 0.5mg 進(jìn)口/國產(chǎn)
運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元生存蛋白1抗原 SMN1(survival of motor neuron 1) 規(guī)格: 0.5mg 進(jìn)口/國產(chǎn)
腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體/凋亡素2配體抗原 TRAIL/Apo2L (tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand) 規(guī)格: 0.5mg 進(jìn)口/國產(chǎn)
CD68抗原 CD68 規(guī)格: 0.5mg 進(jìn)口/國產(chǎn)
胞漿支鏈氨基酸酸轉(zhuǎn)氨酶抗體5,10二氫5,10二甲基吩嗪(>98.0%(GC)(N))Sodium molybdate (≥99.0%)100G通用試劑
雙(羰基二代)四富瓦(>95.0%(W))Methanesulfonyl chloride (98%)100G通用試劑
1,2二(>95.0%(GC))Mevinolin from Aspergillus sp (≥98%,H...20MG通用試劑
4,5雙(甲代)1,3二2(>98.0%(GC))Isonicotinamide (99%)25G通用試劑
二巰基馬來二(>90.0%(N))Manganese II sulfate monohydrate (≥98...500G通用試劑
4,5亞乙基二代1,3二2(>98.0%(GC))ADP Na2, Adenosine 5'Diphosphate Diso...500MG通用試劑
4,5乙撐二代1,3二2(>98.0%(GC))(±)Epinephrine Hydrochloride1G通用試劑
4,5甲二基1,3二2(>95.0%(HPLC))Silicon dioxide (99%)100G通用試劑
3,3'Bithienyl(>98.0%(GC))Carmine (for molecular biology)5G通用試劑
2,1,3并噻二唑(>99.0%(GC))Stachydrine (99%)1G通用試劑
9,9雙(4氨基)芴(升華提純)(>99.0%(GC)(T))N,N′Dicyclohexylcarbodiimide DCC (99%)25G通用試劑
2,7二9,9二(6己基)芴(>98.0%(HPLC))Cobalt(II) Chloride Hexahydrate (≥98....100G通用試劑
29,9'螺二[9H芴](>98.0%(GC))Poly(acrylic acid sodium salt500G通用試劑
2,7雙(4,4,5,5四甲基1,3,2二氧雜硼環(huán)2基)9,9二正辛基芴(>98.0%(HPLC))Aminoguanidine hemisulfate salt (≥98%)25G通用試劑
并環(huán)丁(>94.0%(GC))Aluminum hydroxide25G通用試劑