抗體反應(yīng)特點：

1.高度特異性，特異性是抗原抗體反應(yīng)的主要特征，特定抗原決定簇只與特定抗體結(jié)合；

2.可逆性:抗原與抗體結(jié)合形成抗原抗體復(fù)合物的過程是一種動態(tài)平衡, 其反應(yīng)式為：Ag+AbAg·Ab；

3.適當(dāng)濃度和比例；

4.敏感性:在測定血清中某一物質(zhì)的含量時，化學(xué)比色法的敏感度為mg/ml水平，酶反應(yīng)測定法的敏感度約為5~10μg/ml，定中凝膠擴散法的敏感度與酶反應(yīng)法相仿。

抗體反應(yīng)的因素：

1.電解質(zhì) ：抗原抗體特異結(jié)合后，膠體粒便可發(fā)生脫水作用，此時易受電解質(zhì)影響，如有適當(dāng)濃度的電解質(zhì)存在就會使它們失去部分負(fù)電荷而相互凝聚，于是出現(xiàn)明顯的凝集或沉淀現(xiàn)象。

2.酸堿度:合適的pH為6-8。

3.溫度:37℃通常是抗原體反應(yīng)溫度。

別    名   CYB 5; CYB 5A; CYB5; CYB5_HUMAN; CYB5A; Cytochrome b 5; Cytochrome b5 (microsomal); Cytochrome b5; Cytochrome b5 type A (microsomal); Cytochrome b5 type A; MCB 5; MCB5; Microsomal cytochrome b5; Microsomal cytochrome b5 type A; Type 1 cyt b5.
英文名稱  Anti-Cytochromeb5/CYB5A

中文名稱  細胞色素b5抗體

濃    度  1mg/1ml

規(guī) 格  0.1ml/100μg  0.2ml/200μg

抗體來源  Rabbit

克隆類型  polyclonal

交叉反應(yīng)  Human, Mouse, Rat, Dog, Pig, Cow, Sheep

產(chǎn)品類型  一抗

研究領(lǐng)域  腫瘤 細胞生物 **學(xué) 信號轉(zhuǎn)導(dǎo) 新陳代謝 線粒體

蛋白分子量  predicted molecular weight: 15kDa

性    狀  Lyophilized or Liquid

免 疫 原  KLH conjugated synthetic peptide derived from human Cytochrome b5

產(chǎn)品應(yīng)用   WB=1:100-500  ELISA=1:500-1000  IP=1:20-100  IHC-P=1:100-500  IHC-F=1:100-500  IF=1:100-500

亞    型  IgG

本公司產(chǎn)品僅用于科研實驗。

抗體的熒光標(biāo)記法：

（一）基本原理

賴氨酸殘基的游離e-氨基可與FITC(其激發(fā)波長為492nm,發(fā)射光波長為525nm)共價結(jié)合。與FITC結(jié)合的抗體可用為特異性的探針,以測定細胞相應(yīng)抗原的存在。FITC具有很高的量子產(chǎn)量(發(fā)射光與吸收光的比值,0.85)形成的偶聯(lián)物的穩(wěn)定性很好。

（二）儀器和試劑

1.待偶聯(lián)抗體；

2.碳酸氫鈉緩沖液；

3.疊氮鈉；

4.庵氰酸熒光素；

5.電磁攪拌器。

實驗步驟：

1、石蠟切片，常規(guī)脫蠟至水

2、蒸餾水沖洗，pbs 浸泡5 分鐘（如需采用抗原修復(fù)，在此步驟后進行）。

3、3%雙氧水去離子水（無色液體）孵育15-20 分鐘，以消除內(nèi)源性過氧物酶活性。

4、滴加試劑A（藍色液體）室溫孵育15-20 分鐘，傾去，勿洗。

5、滴加適當(dāng)比例稀釋的一抗，37℃孵育2-3 小時或4℃過夜。

6、PBS 沖洗，3 分鐘3 次。

7、滴加試劑B（黃色液體），室溫或37℃孵育15-20 分鐘。

8、PBS 沖洗，3 分鐘3 次。

9、滴加試劑C（橙色液體），室溫或37℃孵育15-20 分鐘。

10、PBS 沖洗，3 分鐘3 次。

11、顯色劑顯色（DAB 或AEC）

12、自來水充分沖洗。

13、如果需要，可進行復(fù)染，脫水，透明。

14、選擇適當(dāng)?shù)姆馄瑒┓馄?/span>

抗體分子標(biāo)記技術(shù)：

（一）原理

當(dāng)應(yīng)用化學(xué)氧化法時(NaI)遇強氧化劑,離子被氧化為分子,所生成的自由分子可與某些基團進行鹵化反應(yīng)。蛋白質(zhì)分子可進行鹵化反應(yīng)的基團主要為酪氨酸殘基,某些組氨酸殘基也可能進行化。在應(yīng)用胺T( Chloramine T)法的實驗中,所用的氧化劑(1,3,4,6- tetrachloro-3a,6adipheny l-glucoluril)強揮發(fā)性的有機溶劑中。該溶劑加入試管后,先讓其揮發(fā)(即讓氧化劑將試管包被),然后把Na125I和蛋白質(zhì)液加入包被好的試管中,反應(yīng)完成即將混合液移入他管終止反應(yīng)。

（二）準(zhǔn)備

1.試劑

經(jīng)親和層析純化的多克隆抗體或單克隆抗體；0.5mol/L磷酸鈉緩沖液,pH7.5；無載體的Na125I3.7GBq/ml(100mCi/ml)的NaOH液；100g/L三醋酸；70%乙醇；新鮮制備的含2mg/m1絡(luò)胺T的0.5mol/L磷酸鈉緩沖液(pH7.5）；胺T反應(yīng)終止緩沖液；

2.儀器

凝膠過濾柱；￥-記數(shù)器；玻璃纖維濾。

（三）操作要點

1.用胺T法進行化,也可在大約pH7.0的緩沖液中進行；

2.如果氧化反應(yīng)損傷蛋白質(zhì)，可將抗體與異硫氰酸熒光素(FITC)偶聯(lián))胺T量減少到0.02mg/m，并將偏重亞硫酸液的濃度降到0.024mg/ml；

3. Iodogen-包被的試管可在干燥器中,于室溫下保存多年；

4.1251標(biāo)記的抗體,在制備后六周內(nèi)均可使用(1251的半衰期為59.6天）；

5.要注意保證所用的Na1251是新鮮的,陳舊制劑的比活性低；

6.酪氨酸的碘化偶爾會對抗原的抗體結(jié)合位點有干擾,因此降低其結(jié)合能力,但這種情況很少見。

抗體的種類：

抗體是在抗原刺激下產(chǎn)生的，體液性抗體由B淋細胞系產(chǎn)生。根據(jù)其化學(xué)結(jié)構(gòu)和抗原的不同可分為IgG、IgM、IgA、 IgE和IgD5種類型.目前對疫球蛋白G、A、M、E了解較多，對D的功能了解較少。

（1） IgG：是血清中濃度大的一類球蛋白，約占疫球蛋白含量的70～80%，50%分布于血漿。機體受到抗原初次刺激后，其產(chǎn)生時間僅次于IgM。在抗體介導(dǎo)的抗感染免中起主要作用。IgG是球蛋白單體，分子量16萬～18萬，可以通過兔的胎盤，但不能通過豬和牛的胎盤。在體內(nèi)可以有效地抵抗**、病毒等微生物侵襲。在體外的血清學(xué)反應(yīng)中，參與沉淀反應(yīng)、凝集反應(yīng)、補體結(jié)合反應(yīng)和中和反應(yīng)。

（2） IgM：由5個球蛋白單位組成的五聚體，在血清中的含量僅次于IgG，分子量90萬，是體內(nèi)大的球蛋白?？乖醮未碳C體后，IgM出現(xiàn)早,在血清中的含量僅次于IgG，主要分布在血管內(nèi)，可以通過激活補體發(fā)揮溶菌、溶細胞及中和病毒的作用。因其是五聚體，免作用很強，是IgG的100倍，但由于含量僅為IgG的1/10，且持續(xù)時間短，所以在抗感染疫中不能起主要作用。在體外的血清學(xué)反應(yīng)中，參與凝集反應(yīng)和補體結(jié)合反應(yīng)。

（3） IgA：有單體和雙體兩種形式。單體存在于血清中，分子量約為17萬，亦稱為血清型IgA，有**和抗病毒作用。雙體主要存在于外分泌液中，如唾液、淚液、初乳、氣管分泌液，以初乳中的含量高。雙體IgA亦稱為分泌型IgA，由存在于粘膜和組織上的漿細胞產(chǎn)生，分子量40萬，含量較單體高6～８倍，是粘膜的重要防御因素，可以阻止**或病毒吸附于粘膜表面。

（4） IgE：是一種特殊的糖蛋白，為單位體結(jié)構(gòu)，分子量19萬，由消化道、呼吸道粘膜固有層及局部結(jié)中的漿細胞所形成，在血清中含量甚微，是一種致敏抗體，容易吸附在**表面，當(dāng)與相應(yīng)抗原結(jié)合所引起過敏反應(yīng)。在機體抵抗**和病毒的感染中幾乎無作用。

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