抗體反應(yīng)特點(diǎn)：

1.高度特異性，特異性是抗原抗體反應(yīng)的主要特征，特定抗原決定簇只與特定抗體結(jié)合；

2.可逆性:抗原與抗體結(jié)合形成抗原抗體復(fù)合物的過(guò)程是一種動(dòng)態(tài)平衡, 其反應(yīng)式為：Ag+AbAg·Ab；

3.適當(dāng)濃度和比例；

4.敏感性:在測(cè)定血清中某一物質(zhì)的含量時(shí)，化學(xué)比色法的敏感度為mg/ml水平，酶反應(yīng)測(cè)定法的敏感度約為5~10μg/ml，定中凝膠擴(kuò)散法的敏感度與酶反應(yīng)法相仿。

抗體反應(yīng)的因素：

1.電解質(zhì) ：抗原抗體特異結(jié)合后，膠體粒便可發(fā)生脫水作用，此時(shí)易受電解質(zhì)影響，如有適當(dāng)濃度的電解質(zhì)存在就會(huì)使它們失去部分負(fù)電荷而相互凝聚，于是出現(xiàn)明顯的凝集或沉淀現(xiàn)象。

2.酸堿度:合適的pH為6-8。

3.溫度:37℃通常是抗原體反應(yīng)溫度。

別    名   AC133; Antigen AC133; Hematopoietic stem cell antigen; hProminin; PROM1; Prominin I; Prominin like protein 1 precursor; Prominin mouse like 1; prominin1; PROML1; CD133; CORD12; MCDR2; MSTP061; PROML1; RP41; STGD4.
英文名稱(chēng)  Anti-CD133

中文名稱(chēng)  造血干細(xì)胞抗原CD133抗體

濃    度  1mg/1ml

規(guī) 格  0.1ml/100μg  0.2ml/200μg

抗體來(lái)源  Rabbit

克隆類(lèi)型  polyclonal

交叉反應(yīng)  Human, Mouse, Rat

產(chǎn)品類(lèi)型  一抗

研究領(lǐng)域  腫瘤 細(xì)胞生物 **學(xué) 干細(xì)胞

蛋白分子量  predicted molecular weight: 95kDa

性    狀  Lyophilized or Liquid

免 疫 原  KLH conjugated synthetic peptide derived from hu CD133

產(chǎn)品應(yīng)用   WB=1:100-500  ELISA=1:500-1000  IHC-P=1:100-500  IHC-F=1:100-500  Flow-Cyt=1:100-500  ICC=1:100-500  IF=1:50-200

亞    型  IgG

本公司產(chǎn)品僅用于科研實(shí)驗(yàn)。

抗體的熒光標(biāo)記法：

（一）基本原理

賴(lài)氨酸殘基的游離e-氨基可與FITC(其激發(fā)波長(zhǎng)為492nm,發(fā)射光波長(zhǎng)為525nm)共價(jià)結(jié)合。與FITC結(jié)合的抗體可用為特異性的探針,以測(cè)定細(xì)胞相應(yīng)抗原的存在。FITC具有很高的量子產(chǎn)量(發(fā)射光與吸收光的比值,0.85)形成的偶聯(lián)物的穩(wěn)定性很好。

（二）儀器和試劑

1.待偶聯(lián)抗體；

2.碳酸氫鈉緩沖液；

3.疊氮鈉；

4.庵氰酸熒光素；

5.電磁攪拌器。

實(shí)驗(yàn)步驟：

1、石蠟切片，常規(guī)脫蠟至水

2、蒸餾水沖洗，pbs 浸泡5 分鐘（如需采用抗原修復(fù)，在此步驟后進(jìn)行）。

3、3%雙氧水去離子水（無(wú)色液體）孵育15-20 分鐘，以消除內(nèi)源性過(guò)氧物酶活性。

4、滴加試劑A（藍(lán)色液體）室溫孵育15-20 分鐘，傾去，勿洗。

5、滴加適當(dāng)比例稀釋的一抗，37℃孵育2-3 小時(shí)或4℃過(guò)夜。

6、PBS 沖洗，3 分鐘3 次。

7、滴加試劑B（黃色液體），室溫或37℃孵育15-20 分鐘。

8、PBS 沖洗，3 分鐘3 次。

9、滴加試劑C（橙色液體），室溫或37℃孵育15-20 分鐘。

10、PBS 沖洗，3 分鐘3 次。

11、顯色劑顯色（DAB 或AEC）

12、自來(lái)水充分沖洗。

13、如果需要，可進(jìn)行復(fù)染，脫水，透明。

14、選擇適當(dāng)?shù)姆馄瑒┓馄?/span>

抗體分子標(biāo)記技術(shù)：

（一）原理

當(dāng)應(yīng)用化學(xué)氧化法時(shí)(NaI)遇強(qiáng)氧化劑,離子被氧化為分子,所**的自由分子可與某些基團(tuán)進(jìn)行鹵化反應(yīng)。蛋白質(zhì)分子可進(jìn)行鹵化反應(yīng)的基團(tuán)主要為酪氨酸殘基,某些組氨酸殘基也可能進(jìn)行化。在應(yīng)用胺T( Chloramine T)法的實(shí)驗(yàn)中,所用的氧化劑(1,3,4,6- tetrachloro-3a,6adipheny l-glucoluril)強(qiáng)揮發(fā)性的有機(jī)溶劑中。該溶劑加入試管后,先讓其揮發(fā)(即讓氧化劑將試管包被),然后把Na125I和蛋白質(zhì)液加入包被好的試管中,反應(yīng)完成即將混合液移入他管終止反應(yīng)。

（二）準(zhǔn)備

1.試劑

經(jīng)親和層析純化的多克隆抗體或單克隆抗體；0.5mol/L磷酸鈉緩沖液,pH7.5；無(wú)載體的Na125I3.7GBq/ml(100mCi/ml)的NaOH液；100g/L三醋酸；70%乙醇；新鮮制備的含2mg/m1絡(luò)胺T的0.5mol/L磷酸鈉緩沖液(pH7.5）；胺T反應(yīng)終止緩沖液；

2.儀器

凝膠過(guò)濾柱；￥-記數(shù)器；玻璃纖維濾。

（三）操作要點(diǎn)

1.用胺T法進(jìn)行化,也可在大約pH7.0的緩沖液中進(jìn)行；

2.如果氧化反應(yīng)損傷蛋白質(zhì)，可將抗體與異硫氰酸熒光素(FITC)偶聯(lián))胺T量減少到0.02mg/m，并將偏重亞硫酸液的濃度降到0.024mg/ml；

3. Iodogen-包被的試管可在干燥器中,于室溫下保存多年；

4.1251標(biāo)記的抗體,在制備后六周內(nèi)均可使用(1251的半衰期為59.6天）；

5.要注意保證所用的Na1251是新鮮的,陳舊制劑的比活性低；

6.酪氨酸的碘化偶爾會(huì)對(duì)抗原的抗體結(jié)合位點(diǎn)有干擾,因此降低其結(jié)合能力,但這種情況很少見(jiàn)。

抗體的種類(lèi)：

抗體是在抗原刺激下產(chǎn)生的，體液性抗體由B淋細(xì)胞系產(chǎn)生。根據(jù)其化學(xué)結(jié)構(gòu)和抗原的不同可分為IgG、IgM、IgA、 IgE和IgD5種類(lèi)型.目前對(duì)疫球蛋白G、A、M、E了解較多，對(duì)D的功能了解較少。

（1） IgG：是血清中濃度大的一類(lèi)球蛋白，約占疫球蛋白含量的70～80%，50%分布于血漿。機(jī)體受到抗原初次刺激后，其產(chǎn)生時(shí)間僅次于IgM。在抗體介導(dǎo)的抗感染免中起主要作用。IgG是球蛋白單體，分子量16萬(wàn)～18萬(wàn)，可以通過(guò)兔的胎盤(pán)，但不能通過(guò)豬和牛的胎盤(pán)。在體內(nèi)可以有效地抵抗**、病毒等微生物侵襲。在體外的血清學(xué)反應(yīng)中，參與沉淀反應(yīng)、凝集反應(yīng)、補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng)和中和反應(yīng)。

（2） IgM：由5個(gè)球蛋白單位組成的五聚體，在血清中的含量?jī)H次于IgG，分子量90萬(wàn)，是體內(nèi)大的球蛋白?？乖醮未碳C(jī)體后，IgM出現(xiàn)早,在血清中的含量?jī)H次于IgG，主要分布在血管內(nèi)，可以通過(guò)激活補(bǔ)體發(fā)揮溶菌、溶細(xì)胞及中和病毒的作用。因其是五聚體，免作用很強(qiáng)，是IgG的100倍，但由于含量?jī)H為IgG的1/10，且持續(xù)時(shí)間短，所以在抗感染疫中不能起主要作用。在體外的血清學(xué)反應(yīng)中，參與凝集反應(yīng)和補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng)。

（3） IgA：有單體和雙體兩種形式。單體存在于血清中，分子量約為17萬(wàn)，亦稱(chēng)為血清型IgA，有**和抗病毒作用。雙體主要存在于外分泌液中，如唾液、淚液、初乳、氣管分泌液，以初乳中的含量高。雙體IgA亦稱(chēng)為分泌型IgA，由存在于粘膜和組織上的漿細(xì)胞產(chǎn)生，分子量40萬(wàn)，含量較單體高6～８倍，是粘膜的重要防御因素，可以阻止**或病毒吸附于粘膜表面。

（4） IgE：是一種特殊的糖蛋白，為單位體結(jié)構(gòu)，分子量19萬(wàn)，由消化道、呼吸道粘膜固有層及局部結(jié)中的漿細(xì)胞所形成，在血清中含量甚微，是一種致敏抗體，容易吸附在**表面，當(dāng)與相應(yīng)抗原結(jié)合所引起過(guò)敏反應(yīng)。在機(jī)體抵抗**和病毒的感染中幾乎無(wú)作用。

巨噬表面分子抗原 規(guī)格：  0.5mg Mac-1 (Mac-1/CR3/CD11b+CD18)

N-鈣粘附分子抗原 規(guī)格：  0.5mg N-cadherin

腫瘤抑制基因抗原（野生型P53） 規(guī)格：  0.5mg P53(wt-p53)

脂聯(lián)素受體-1(抗原) 規(guī)格：  0.5mg Adipo R1(adiponectin receptor 1)

磷酸化Smad2抗原 規(guī)格：  0.5mg phospho-Smad2(p-Ser465)petide

腱糖蛋白-C(固生蛋白)C端抗原 規(guī)格：  0.5mg Tn-C(Tenascin-C)C-Terminus

結(jié)締組織生長(zhǎng)因子(多肽抗原) 規(guī)格：  0.5mg CTGF (connective tissue growth factor)

XIAP相關(guān)因子1凋亡抑制蛋白抗原 規(guī)格：  0.5ml XAF1(XIAP-associated factor 1)

麻疹病毒紅血球凝集素蛋白多肽 規(guī)格：  0.5mg Measles virus protein(Plant2 derived measles virus hemagglutinin protein)

谷氨酸受體（N端抗原） 規(guī)格：  0.5mg NR2A (Glutamate receptor2A)

微管相關(guān)蛋白（抗原） 規(guī)格：  0.5mg Tau protein

粟酒裂殖酵母 Schizosaccharomyces pombe綠色木霉 Trichoderma viride

香菇 Lentinula edodes苜蓿中華根瘤

膠韌革 Gloeostereum incarnatum宇佐美曲霉變種 Aspergillus usamii var.

苜蓿中華根瘤 Sinorhizobium meliloti漆斑 Myrothecium sp.

RGC-5, 小鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)HKC(人胚腎上皮)

HBZY-1(大鼠腎小球系膜)香菇 Lentinula edodes

豌豆根瘤 Rhizobium leguminosarum釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae

ECV-304(人臍靜脈內(nèi)皮)HT-29/大腸

HAN(人羊膜)熱帶假絲酵母 Candida tropicalis

釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae解脂亞羅酵母 Yarrowia lipolytica

造血干細(xì)胞抗原CD133抗體質(zhì)量規(guī)格：粒徑0.490.69mmSodiumoleate,≥99%

質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品，用于萜分析，≥99.5%(GC)Sodiumamide,95%

質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品Sodiumhydrogendifluoride,98%

質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品4Aminobenzoicacidsodiumsalt,≥99%

質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥99.7%(GCSodiumdodecylbenzenesulfonate

質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品Sodiumstearate,≥99%

質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品,98.5%Sodiumphenolate,99%

質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品Sodiumbenzenesulfonate,97%

質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品Sodiumsalicylate,≥99.5%

質(zhì)量規(guī)格：0.100mg/mlSodiummalonate,≥97.0%

質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品,95%Sodiumpropionate,≥99.0%

質(zhì)量規(guī)格：100μg/ml,u=4%Sodiumoxalate,≥99%

質(zhì)量規(guī)格：10μg/ml,u=7%Sodiumhexafluoroaluminate

質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品Sodiumfluorosilicate

質(zhì)量規(guī)格：100μg/ml,u=2%Sodiummetasilicatenonahydrate,≥98%