產(chǎn)品名稱：脊髓灰質(zhì)炎病毒熒光PCR檢測(cè)試劑盒

貨號(hào)：BH-P64483
服務(wù)流程：
接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測(cè)——樣品cDNA合成——定量試驗(yàn)——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務(wù)。

它具有下列特點(diǎn)：

1. 即開即用，用戶只需要提供樣品RNA模板。
2. 引物和探針經(jīng)過優(yōu)化，靈敏性高。
3. 提供陽性對(duì)照，便于區(qū)分假陰性樣品。
4. 特異性高，引物是根據(jù)高度保守區(qū)設(shè)計(jì)，不會(huì)跟其他病毒的RNA發(fā)生交叉反應(yīng)。
5. 本產(chǎn)品足夠 50 次 20μL 體系的探針法熒光定量 RT-PCR 反應(yīng)。
6. 本產(chǎn)品只能用于科研。

實(shí)驗(yàn)方法步驟：

方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s →58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保溫7min。
使用方法:
一、樣品 DNA 的制備
用自選方法提取 Cps DNA。注意：DNA 純化方法是決定檢測(cè)靈敏度的關(guān)鍵因素。如果不能很好純化樣品 DNA，后面的 PCR 再靈敏也不能提高整體檢測(cè)靈敏度。
二、制備 Cps 標(biāo)準(zhǔn)曲線（以 10-10E6 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽性對(duì)照，只提供沒有傳染性的、可以直接使用的 DN**段作為陽性對(duì)照。
1. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管，分別為 6，5，4，3，2 和 1 號(hào)。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 超純水（*好用帶芯槍頭，下同）。
3. 先將本試劑盒提供的陽性對(duì)照用 TE 緩沖液或超純水 10 倍梯度稀釋到10E7 拷貝/μL（注：請(qǐng)不要將本試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)品一次性稀釋至 10E7拷貝/μL，建議每次稀釋 10 倍，梯度稀釋至 10E7 拷貝/μL）。
4. 在 6 號(hào)管中加入 5 μL 10E7 拷貝/μL 的 Cps 陽性對(duì)照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 10E6 拷貝/μL 的陽性對(duì)照。
5. 換槍頭，從 6 號(hào)管中取 5 μL 溶液到 5 號(hào)管中，充分震蕩 1 分鐘，得 10E5拷貝/μL 的陽性對(duì)照。
6. 換槍頭，從 5 號(hào)管中取 5 μL 溶液到 4 號(hào)管中，重復(fù)上面的操作直到得到 6個(gè)稀釋度的陽性對(duì)照。
7. NC 管中不加任何陽性對(duì)照。
8. 從 1-6 號(hào)管中分別取 5 μL 和待測(cè)樣品一起進(jìn)行定量 PCR（見下步），每個(gè)樣品做 3 次重復(fù)。PCR 后得到每個(gè)陽性對(duì)照稀釋樣品的熒光 PCR Ct 值，并以之為縱軸，以濃度的對(duì)數(shù)值為橫軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
Ai-prox-1 /FITC 熒光su標(biāo)記兔抗人、大、小鼠prox-1蛋白抗體IgGMulti-class aibodies： 0.2ml

Rabbit Ai-rat IgM Whole serum 兔抗大鼠IgM抗血清Multi-class aibodies： 1ml

整合su連接激mei-1抗體 Ai-ILK-1 0.1ml

Rabbit ai-chicken IgG whole serum 兔抗雞IgG抗血清 1ml

FANCA 英文名稱： 范可尼貧血組蛋白A抗體 0.2ml

Rhesus aibody Rh phospho-PRKD3(Ser41) 磷suan化蛋白激meiC nu型抗體  0.1ml

Rabbit Ai-rat IgM Whole serum 兔抗大鼠IgM抗血清Multi-class aibodies： 1ml

IL-23R(Ierleukin-23 receptor) 白介su-23受體抗原Multi-class aibodies： 0.5mg

Ai-Actinin alpha 4 α-輔肌動(dòng)蛋白4抗體Multi-class aibodies： 0.2ml

Rhesus aibody Rh phospho-CDK6 (Tyr13) 磷suan化周期su依賴性激mei6抗體  0.1ml

人IgG 干粉 10mg/50mg/100mg 國產(chǎn)

WISP3 英文名稱： W1信號(hào)通路蛋白3抗體 0.2ml

DOCK4 英文名稱： 細(xì)胞質(zhì)分裂付出蛋白4抗體 0.2ml

Ai-Actinin alpha 4 α-輔肌動(dòng)蛋白4抗體Multi-class aibodies： 0.2ml

SELS 英文名稱： 炎癥負(fù)調(diào)控因子蛋白抗體 0.1ml

EphB1 英文名稱： 酪suan蛋白激mei受體B1抗體 0.2ml

氨肽meiN抗體 Ai-CD13/ANPEN 0.1ml

Ai-Influenza A Virus H3/HRP 辣根過氧化物mei標(biāo)記羊抗季節(jié)性流感病毒H3抗體IgGMulti-class aibodies： 0.2ml

Rhesus aibody Rh phospho-HDAC2(Ser394) 磷suan化組蛋白去乙?；痬ei2抗體  0.1ml

Matrixyl Acetate 五勝肽/美容肽—M肽Multi-class aibodies： 1g

脊髓灰質(zhì)炎病毒熒光PCR檢測(cè)試劑盒1,6-二磷suan果糖三鈉鹽(98-101.0%，BR)吡肟寡核suan探針非同位suHRP化學(xué)發(fā)光法RNA北方雜交完全試劑盒

1,6-二磷suan果糖三鈉鹽(98-101.0%，BR)麥迪霉su寡核suan探針非同位suAP化學(xué)發(fā)光法RNA北方雜交完全試劑盒

銨(>99%，BR)妥布霉su寡核suan探針非同位suHRP－DAB顯色法RNA北方雜交完全試劑盒

甲基對(duì)苯二鹽suan鹽(>99%，BR)氟氯寡核suan探針非同位suAP－BCIP/NBT法RNA北方雜交完全試劑盒

1,3,5-三羥基苯二水合物(>98%，BR)·3/2H2O差異相減雜交試劑盒

碳suan無水(>98%，BR)侖氨BLOTTO 10核suan雜交封閉溶液

?；?/span>suan(>98.5%，JP )克拉維suan超聲化鮭魚精單鏈DNA

草suan銨(98~101%,BR)甲磺suan雜交清洗液

注意事項(xiàng)：
①加入試劑的順序應(yīng)一致，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照說明書中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
④底物A應(yīng)揮發(fā)，避免長時(shí)間打開蓋子。底物B對(duì)光敏感，避免長時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時(shí)，避免使用帶金屬部分的加樣器 。
⑦實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。
⑧試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲(chǔ)存，使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄，不可保存。
⑨不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。