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產品名稱:傳染性法氏囊病病毒熒光PCR檢測試劑盒
貨號:BH-P64462
服務流程:
接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質量檢測——樣品cDNA合成——定量試驗——數據分析——結果交付——售后服務。
它具有下列特點:
1. 即開即用,用戶只需要提供樣品RNA模板。
2. 引物和探針經過優(yōu)化,靈敏性高。
3. 提供陽性對照,便于區(qū)分假陰性樣品。
4. 特異性高,引物是根據高度保守區(qū)設計,不會跟其他病毒的RNA發(fā)生交叉反應。
5. 本產品足夠 50 次 20μL 體系的探針法熒光定量 RT-PCR 反應。
6. 本產品只能用于科研。
實驗方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s →58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保溫7min。
使用方法:
一、樣品 DNA 的制備
用自選方法提取 Cps DNA。注意:DNA 純化方法是決定檢測靈敏度的關鍵因素。如果不能很好純化樣品 DNA,后面的 PCR 再靈敏也不能提高整體檢測靈敏度。
二、制備 Cps 標準曲線(以 10-10E6 這 6 個 10 倍稀釋度為例。由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原,本產品不提供活體病毒做陽性對照,只提供沒有傳染性的、可以直接使用的 DN**段作為陽性對照。
1. 標記 6 個離心管,分別為 6,5,4,3,2 和 1 號。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 超純水(*好用帶芯槍頭,下同)。
3. 先將本試劑盒提供的陽性對照用 TE 緩沖液或超純水 10 倍梯度稀釋到10E7 拷貝/μL(注:請不要將本試劑盒提供的標準品一次性稀釋至 10E7拷貝/μL,建議每次稀釋 10 倍,梯度稀釋至 10E7 拷貝/μL)。
4. 在 6 號管中加入 5 μL 10E7 拷貝/μL 的 Cps 陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 10E6 拷貝/μL 的陽性對照。
5. 換槍頭,從 6 號管中取 5 μL 溶液到 5 號管中,充分震蕩 1 分鐘,得 10E5拷貝/μL 的陽性對照。
6. 換槍頭,從 5 號管中取 5 μL 溶液到 4 號管中,重復上面的操作直到得到 6個稀釋度的陽性對照。
7. NC 管中不加任何陽性對照。
8. 從 1-6 號管中分別取 5 μL 和待測樣品一起進行定量 PCR(見下步),每個樣品做 3 次重復。PCR 后得到每個陽性對照稀釋樣品的熒光 PCR Ct 值,并以之為縱軸,以濃度的對數值為橫軸,繪制標準曲線。
Ai-phospho-P53 (Ser15) /FITC 熒光su標記磷suan化抑制基因P53抗體IgGMulti-class aibodies: 0.2ml
Mouse Ai-human IgM/ Biotin 生物su化小鼠抗人IgMMulti-class aibodies: 0.3ml
鈣結合蛋白抗體 Ai-CR 0.2ml
Rabbit Ai-pig IgG/PE-CY5 PE-CY5標記的兔抗豬IgG 0.1ml
FANCM 英文名稱: 范可尼貧血相關蛋白M抗體 0.2ml
Rhesus aibody Rh PI 3 Kinase p85 beta 磷脂酰肌激meip85β抗體 0.1ml
Mouse Ai-human IgM/ Biotin 生物su化小鼠抗人IgMMulti-class aibodies: 0.3ml
Caspase-1 人Caspase-1Multi-class aibodies: 48T
Ai-DBH 多巴胺β羥化mei抗體Multi-class aibodies: 0.1ml
Rhesus aibody Rh NETO1 腦低密度脂蛋白受體蛋白1抗體 0.2ml
Human visfatin ELISA Kit 人內脂su/內臟脂肪su 96T
Tubulin-Beta 英文名稱: 微管蛋白抗體(組化用抗體)Tubulin β 0.1ml
CARD14 英文名稱: 凋亡加強結構域蛋白14抗體 0.2ml
Ai-DBH 多巴胺β羥化mei抗體Multi-class aibodies: 0.1ml
14-3-3 Tau 英文名稱: 14-3-3τ蛋白抗體 0.1ml
EGFR 英文名稱: 表皮生長因子受體抗體 0.1ml
磷脂酰肌激mei抗體 Ai-PI3K/P85 alpha 0.1ml
Ai-Phospho-Stat2 (Tyr690)/FITC 熒光su標記磷suan化信號轉導和轉錄激活因子2抗體IgGMulti-class aibodies: 0.2ml
Rhesus aibody Rh phospho-MYL9(Thr19) 磷suan化肌球蛋白輕鏈9抗體 0.1ml
Ang- II (Angiotensin II ) 血管緊張suII抗原Multi-class aibodies: 0.5mg
傳染性法氏囊病病毒熒光PCR檢測試劑盒無水碳suan鈉川楝子凍切片組織βAMYLOID蛋白表達熒光顯微鏡檢測試劑盒
D-果糖匙羹藤葉石蠟切片組織βAMYLOID蛋白表達熒光顯微鏡檢測試劑盒
N,N,N',N'-甲基乙二菝葜() 載玻片βAMYLOID蛋白表達NBT顯色光學顯微鏡檢測試劑盒
核黃su磷suan鈉水合物玉竹 凍切片組織βAMYLOID蛋白表達NBT顯色光學顯微鏡檢測試劑盒
溴化乙錠溶液,10 mg/ml地耳草 石蠟切片組織βAMYLOID蛋白表達NBT顯色光學顯微鏡檢測試劑盒
核suan膠體染料飛龍掌血葉 βAMYLOID蛋白表達比色法定量檢測試劑盒
D-葡萄糖無水朱砂根 βAMYLOID蛋白表達熒光定量檢測試劑盒
桃金娘果 βAMYLOID蛋白表達西方雜交分析試劑盒
注意事項:
①加入試劑的順序應一致,以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。
④底物A應揮發(fā),避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標板時應充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器 。
⑦實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質。
⑧試劑應按標簽說明書儲存,使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄,不可保存。
⑨不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。